人疱疹病毒6型101K被膜蛋白表达克隆的构建及应用

发布时间：2023-03-12 17:06

　　目的 构建人疱疹病毒6型(HHV-6)101K被膜蛋白的原核高效表达克隆，制备用于活动性HHV-6感染血清学诊断的基因工程抗原。 方法 应用细胞培养技术从临床唾液标本分离HHV-6毒株，出现细胞病变者用HHV-6特异性引物及限制性酶切分析法进行初步鉴定；PCR扩增HHV-6B 101K被膜蛋白主要抗原决定簇区(666～834aa)编码基因片段(nt2347～2853)，并导入T载体进行测序，与Genebank标准毒株序列比较以进一步鉴定。目的基因及表达载体pThioHis A分别经双酶切后连接，转化宿主菌E.coli BL21，IPTG诱导蛋白表达，表达产物经镍-敖合物琼脂糖树脂柱亲和层析初步纯化，以Western-Blot鉴定其抗原性和特异性。用纯化重组蛋白包被ELISA反应板，检测197份血清中HHV-6 IgM抗体，与间接免疫荧光(IFA)检测的结果进行比较，同时检测15份HCMV阳性血清，以分析重组蛋白的特异性。 结果 PCR扩增获得的目的基因序列与Genebank中HHV-6B标准毒株Z29序列一致。HHV-6 101K融合蛋白可在E.coli BL21...

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要仪器与设备
    2.2 主要试剂及其配制
    2.3 目的基因选择
    2.4 目的基因的获取和纯化
    2.5 载体pThioHis A的制备和纯化
    2.6 原核重组表达质粒的构建
    2.7 重组克隆的诱导表达及表达蛋白的检测
    2.8 目的融合蛋白的纯化
    2.9 重组蛋白抗原性及特异性分析
3 结果
    3.1 HHV-6毒株的分离培养及鉴定
    3.2 目的基因的PCR扩增
    3.3 目的基因的序列鉴定
    3.4 原核重组表达质粒的鉴定
    3.5 表达融合蛋白的检测
    3.6 纯化融合蛋白的检测
    3.7 重组蛋白抗原性及特异性分析
4 讨论
5 小结
附表
参考文献
致谢
文献综述



本文编号：3761610