大肠杆菌α-溶血素分泌表达系统的构建及应用初探

发布时间：2023-03-13 20:53

　　分泌性表达外源基因是近年来在构建活载体疫苗中常常采用的策略。分泌表达能减轻细菌载体的代谢负担，提高疫苗的免疫效果。引起人泌尿道感染的大肠杆菌(Uropathogenic Escherichia coli，UPEC)的α-溶血素分泌系统是目前研究最透彻的革兰氏阴性菌Ⅰ型分泌系统。该系统组成简单，由HlyB、HlyD、TolC三个转运蛋白组成：适用范围广，只要宿主菌的外膜上具有TolC样蛋白，理论上都可以使用此分泌系统构建分泌型活载体疫苗。所以α-溶血素分泌系统是目前应用最广泛的细菌内源性分泌系统。 本研究首先从UPEC菌株J96染色体上克隆了包括上游调控序列在内的α-溶血素分泌系统决定簇序列，利用基因测序和血琼脂平板溶血环生成实验对克隆产物进行了鉴定，结果表明成功获得了序列正确、功能正常的α-溶血素分泌系统基因簇片段。参考以前构建分泌型表达质粒的经验，分别将需要表达的外源基因(ureB-HspA、hIL-6、hspA、trxA)克隆后，将外源基因片段和包含hlyAs、hlyB、hlyD基因序列的hlyAsBD片段与表达载体pQE30连接，构建了系列分泌表达质粒载体及其非分泌的对照...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
英文摘要
缩略词表
前言
第一部分 UPEC菌株J96染色体α-溶血素分泌系统相关基因的克隆与鉴定
    实验材料
    实验方法
    实验结果
    实验结果讨论
第二部分 分泌型表达载体的构建及其分泌表达效果的初步验证
    实验材料
    实验方法
    实验结果
    实验结果讨论
总结
参考文献
致谢
附: 综述



本文编号：3762372