肺动脉平滑肌细胞的结构变化在缺氧性肺动脉高压发生、发展中的作用及其机制初探
发布时间：2023-04-25 21:52
本工作从整体、组织、细胞、分子水平对PASMC在肺血管结构重建中的变化特点、作用及其发生机制作了较为系统的研究。主要结果如下： 一、PASMC的结构变化在HPH发生、发展中的作用 (1) 正常肺腺泡内动脉中非肌性动脉(NMA)构成比最大，因此其对肺血流量和阻力的改变有很大缓冲作用，具有很大的代偿能力；而IAA的另两组份——肌性动脉(MA)和部分肌性动脉(PMA)则是控制PAP的主要血管段。实验结果表明，缺氧1d，IAA即出现肌化(MA增多、NMA减少)，并随缺氧时间延长而加重，导致阻力段血管延长，致使PAP升高，二者呈密切相关。肺血管结构变化的这一特点无疑是HPH发生的结构基础。 (2) 首次在整体动物上观察到，缺氧后还可能存在PASMC表型的动态变化。即整个缺氧进程中(1～40d)，随着缺氧时间的延长，部分PASMC有由收缩表型→部分合成表型→合成表型→部分合成表型→收缩表型转变的可能性。相应肺动脉壁羟脯氨酸(胶原的主要结构氨基酸)含量亦由持续增加过渡到出现下降趋势。提示缺氧状态下，PASMC表型变化不是固定不变，血管结构重建有可逆的可能，为HPH防治显示了较...
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文缩写词
1.文献综述
2.前言
3.材料与方法
3.1.主要试剂及仪器
3.2.主要溶液的配制
3.3.整体动物实验
3.3.1.动物模型
3.3.2.血流动力学指标测定
3.3.3.IAA结构观察
3.3.3.1.IAA分类计数
3.3.3.2.IAA内膜面积测量及EC核计数
3.3.3.3.IAA超微结构观察
3.3.4.肺外动脉结构与相应功能的观察
3.3.4.1.超微结构观察
3.3.4.2.离体肺动脉环Ach内皮依赖性舒张反应的测定
3.3.4.3.肺动脉壁羟脯氨酸含量测定
3.4.离体细胞培养
3.4.1.成年牛、新生小牛PASMC体外培养及生长曲线
3.4.1.1.贴块法培养PASMC
3.4.1.2.绘制生长曲线
3.4.2.培养PASMC缺氧模型的建立及有关指标测定、药物干预实验
3.4.2.1.相对生长静息PASMC的获取
3.4.2.2.缺氧模型
3.4.2.3.3H-TdR参入法检测PASMC DNA合成
3.4.2.4.DNA含量测定
3.4.2.5.影响PASMC 3H-TdR参入的药物干预实验
3.4.3.培养PASMC透射电镜标本制备
3.4.4.新生小牛、成年牛PAEC培养、缺氧实验、缺氧EC条件培养液(HECCM)对培养PASMC 3H-TdR参入的影响
3.4.4.1.PAEC体外培养
3.4.4.2.缺氧实验
3.4.4.3.HECCM的收集及对培养PASMC 3H-TdR参入的影响
3.4.5.利用核酸分子原位杂交技术检测培养PASHC内原癌基因mRNA表达
3.4.5.1.平滑肌(SM)α-actin及非肌性(NM)β-actin基因质粒转化、扩增
3.4.5.2.光敏生物素直接标记SM α-actin和NM β-actin目的基因质粒DNA
3.4.5.3.培养PASMC原位杂交
3.4.6.培养PASMC总RNA的c-myc斑点及Northern膜印迹杂交
3.4.6.1.细胞总RNA的提取
3.4.6.2.c-myc斑点杂交
3.4.6.3.Northern膜印迹杂交
3.4.6.4.用随机寡核苷酸引物合成均一标记的c-myo cDNA探针
3.4.6.5.分子杂交及放射自显影
3.5.数据处理
4.结果
4.1.IAA肌化与肺循环血流动力学变化趋势的关系
4.2.肺动脉中膜SMC表型及肺动脉壁羟脯氨酸含量变化与PAP的关系
4.3.肺动脉EC结构及Ach内皮依赖性舒张反应的动态变化
4.4.缺氧时培养PAEC的变化及PAEC对SMC增殖的影响
4.5.缺氧对培养PASMC的直接影响
4.5.1.缺氧对PASMC增殖的影响
4.5.2.缺氧对PASMC表型的影响
4.5.3.缺氧对施用了细胞信息传导途径干预药物后PASMC 3H-TdR参入的影响
4.5.3.1.异搏定、H7
4.5.3.2.PMA、EGF
4.5.3.3.EGF+PMA、异搏定+PMA复合作用
4.5.4.缺氧对PASMC c-myc mRNA表达的影响
4.6.764-3对PASMC 3H-TdR参入的影响
附：1.电镜照片插图
2.照片说明
5.讨论
5.1.PASMC的结构变化在缺氧性肺动脉高压发生、发展中的作用
5.2.缺氧时PASMC结构变化的原因
5.2.1.PAEC结构和功能的变化对PASMC的影响
5.2.2.缺氧对SMC结构变化的直接影响及其作用途径初探
6.总结
7.参考文献
8.英文摘要
已发表和待发表的研究论文及论文摘要
致谢
本文编号：3801132
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文缩写词
1.文献综述
2.前言
3.材料与方法
3.1.主要试剂及仪器
3.2.主要溶液的配制
3.3.整体动物实验
3.3.1.动物模型
3.3.2.血流动力学指标测定
3.3.3.IAA结构观察
3.3.3.1.IAA分类计数
3.3.3.2.IAA内膜面积测量及EC核计数
3.3.3.3.IAA超微结构观察
3.3.4.肺外动脉结构与相应功能的观察
3.3.4.1.超微结构观察
3.3.4.2.离体肺动脉环Ach内皮依赖性舒张反应的测定
3.3.4.3.肺动脉壁羟脯氨酸含量测定
3.4.离体细胞培养
3.4.1.成年牛、新生小牛PASMC体外培养及生长曲线
3.4.1.1.贴块法培养PASMC
3.4.1.2.绘制生长曲线
3.4.2.培养PASMC缺氧模型的建立及有关指标测定、药物干预实验
3.4.2.1.相对生长静息PASMC的获取
3.4.2.2.缺氧模型
3.4.2.3.3H-TdR参入法检测PASMC DNA合成
3.4.2.4.DNA含量测定
3.4.2.5.影响PASMC 3H-TdR参入的药物干预实验
3.4.3.培养PASMC透射电镜标本制备
3.4.4.新生小牛、成年牛PAEC培养、缺氧实验、缺氧EC条件培养液(HECCM)对培养PASMC 3H-TdR参入的影响
3.4.4.1.PAEC体外培养
3.4.4.2.缺氧实验
3.4.4.3.HECCM的收集及对培养PASMC 3H-TdR参入的影响
3.4.5.利用核酸分子原位杂交技术检测培养PASHC内原癌基因mRNA表达
3.4.5.1.平滑肌(SM)α-actin及非肌性(NM)β-actin基因质粒转化、扩增
3.4.5.2.光敏生物素直接标记SM α-actin和NM β-actin目的基因质粒DNA
3.4.5.3.培养PASMC原位杂交
3.4.6.培养PASMC总RNA的c-myc斑点及Northern膜印迹杂交
3.4.6.1.细胞总RNA的提取
3.4.6.2.c-myc斑点杂交
3.4.6.3.Northern膜印迹杂交
3.4.6.4.用随机寡核苷酸引物合成均一标记的c-myo cDNA探针
3.4.6.5.分子杂交及放射自显影
3.5.数据处理
4.结果
4.1.IAA肌化与肺循环血流动力学变化趋势的关系
4.2.肺动脉中膜SMC表型及肺动脉壁羟脯氨酸含量变化与PAP的关系
4.3.肺动脉EC结构及Ach内皮依赖性舒张反应的动态变化
4.4.缺氧时培养PAEC的变化及PAEC对SMC增殖的影响
4.5.缺氧对培养PASMC的直接影响
4.5.1.缺氧对PASMC增殖的影响
4.5.2.缺氧对PASMC表型的影响
4.5.3.缺氧对施用了细胞信息传导途径干预药物后PASMC 3H-TdR参入的影响
4.5.3.1.异搏定、H7
4.5.3.3.EGF+PMA、异搏定+PMA复合作用
4.5.4.缺氧对PASMC c-myc mRNA表达的影响
4.6.764-3对PASMC 3H-TdR参入的影响
附：1.电镜照片插图
2.照片说明
5.讨论
5.1.PASMC的结构变化在缺氧性肺动脉高压发生、发展中的作用
5.2.缺氧时PASMC结构变化的原因
5.2.1.PAEC结构和功能的变化对PASMC的影响
5.2.2.缺氧对SMC结构变化的直接影响及其作用途径初探
6.总结
7.参考文献
8.英文摘要
已发表和待发表的研究论文及论文摘要
致谢
本文编号：3801132
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