siRNA特异性干扰EgTPx基因表达对细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤机制的影响

发布时间：2023-05-24 23:02

　　目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性干扰EgTPx基因表达后对细粒棘球蚴(Echi-nococcus granulosus,Eg)原头节DNA氧化损伤机制的影响。方法利用电穿孔法将EgTPx-siRNA干扰序列转染细粒棘球蚴原头节,实验分为EgTPx-siRNA-60、115、250干扰组,阴性对照组和空白对照组。电转3d后,协同自然状态下原头节体外耐受H₂O₂最大浓度干预1h,综合伊红拒染试验和碱性磷酸酶检测干扰前后原头节活性变化及qRT-PCR检测干扰前后EgTPx-mRNA表达水平变化筛选最佳EgTPx-siRNA干扰序列。采用单细胞凝胶电泳法(彗星试验)检测干扰前后原头节DNA氧化损伤程度变化;采用试剂盒法检测原头节体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,分析siRNA干扰对DNA氧化损伤机制的影响。结果自然状态下细粒棘球蚴原头节体外耐受H₂O₂的最大浓度为0.4mmol/L,干预时间为1h;电穿孔法将绿色荧光...

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
        1.1 细粒棘球蚴原头节
        1.2 试剂
        1.3 仪器
    2 方法
        2.1 EgTPx基因siRNA干扰序列的设计与合成
        2.2 细粒棘球蚴原头节体外耐受H2O2最大浓度的确定
        2.3 EgTPx-siRNA干扰序列的筛选
            2.3.1 siRNA干扰EgTPx基因的表达
            2.3.2 转染效率分析
            2.3.3 细粒棘球蚴原头节活性检测
            2.3.4 细粒棘球蚴原头节EgTPx-mRNA表达水平检测
        2.4 细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤情况检测
        2.5 细粒棘球蚴原头节体内ROS含量检测
        2.6 统计学分析
结果
    1细粒棘球蚴原头节体外耐受H2O2最大浓度的确定
    2最佳EgTPx-siRNA干扰序列的筛选
        2.1 EgTPx-siRNA电穿孔转染效率
        2.2干扰EgTPx基因表达对细粒棘球蚴原头节活性的影响
            2.2.1细粒棘球蚴原头节存活率
            2.2.2碱性磷酸酶活性
        2.3干扰EgTPx基因表达后细粒棘球蚴原头节EgTPx-mRNA水平变化
    3 干扰EgTPx基因表达后细粒棘球蚴原头节DNA损伤程度变化
    4 干扰EgTPx基因表达后细粒棘球蚴原头节体内ROS含量检测
讨论



本文编号：3822451