可溶性肿瘤坏死因子受体（P55）和IgGFc融合蛋白原核表达载体的构建及其表达、鉴定

发布时间：2023-08-06 17:46

　　目的：构建可溶性TNF受体(P55) 和IgGFc融合蛋白的高效原核表达载体，实现 在原核细胞中的高效表达。在体外对TNFR：IgGFc融合蛋白的免疫学活性和拮抗 TNF毒副作用的生物学活性进行初步研究，以期为体内研究提供基本条件。方法： 以人心肌cDNA文库为模板，PCR扩增TNF受体(P55) 胞外区全基因(tumor necrosis factor receptor extra-cellular domains，TNFR-ED)，亚克隆入pGEM-T／IgGFc 中构建pGEM-T／TNFR-ED：IgGFc重组子，然后以其为模板，在上游引物中引入原 核细胞高频密码子，再次PCR扩增去信号肽TNF受体(P55) 胞外区和IgGFc 融合蛋白基因(TNFR：IgGFc)，亚克隆入pUC19载体，经序列测定正确后克隆入 原核表达载体pRsetA中。将获得的原核表达质粒pRsetA／TNFR：IgGFc转入大肠 杆菌BL21(DE3) ，经IPTG诱导表达，对表达产物进行免疫学，生物学活性鉴定 和初步纯化。结果：TNFR：IgGFc融合蛋白获得了高效表达并以包涵体的形式存 在，SDS-...

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

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英文摘要
1. 前言
2. 材料和方法
3. 结果
4. 讨论
5. 结论
6. 论文参考文献
7. 附录
8. 致谢
9. 综述
10. 综述参考文献



本文编号：3839770