p53信号通路在MTB感染肺泡Ⅱ型上皮细胞系A549中的免疫调控作用

发布时间：2023-08-26 00:18

　　【目的】探讨p53通路在结核分枝杆菌(MTB)感染肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)中的免疫调控作用。【方法】将供试的p53基因过表达和干扰载体转染293T细胞,对其作用效果进行验证。利用脂质体分别转染p53基因过表达和干扰载体到AECⅡ细胞系A549中,建立p53基因过表达和干扰A549系模型细胞。用牛结核分枝杆菌减毒株(BCG)分别感染未经任何处理的A549细胞(感染对照组)及模型细胞,以未感染BCG的各类A549细胞为参照。以β-actin为内参基因,通过实时荧光定量PCR和Western blot来分析信号分子p53、p300、NF-κB、TLR-4、TRAF6在mRNA和蛋白水平的表达,以及炎症细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-8的mRNA表达情况。【结果】过表达载体plRES2-EGFP-p53 WT和干扰载体TP53-RNAi(2648)作用效果明显,成功建立了p53基因过表达和干扰的A549细胞模型。BCG感染的对照组、p53基因过表达组和干扰组的A549细胞中,p53、p300、NF-κB、TLR-4、TRAF6在mRNA和蛋白水平的表达显著或极显著高于相应的...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株与细胞株
    1.2 主要试剂
    1.3 p53基因过表达和干扰载体的验证
    1.4 p53基因过表达和干扰A549细胞模型的建立
    1.5 BCG感染对模型A549细胞p53信号通路相关因子表达的影响
        1.5.1 实时荧光定量PCR
        1.5.2 Western blot分析
    1.6 数据分析
2 结果与分析
    2.1 p53基因过表达和干扰载体作用效果的验证
    2.2 p53基因过表达和干扰A549细胞模型的建立
    2.3 BCG感染模型A549细胞p53信号通路相关因子mRNA和蛋白水平的表达分析
        2.3.1 mRNA水平表达分析
        2.3.2 蛋白水平表达分析
    2.4 BCG感染模型A549细胞炎症细胞因子mRNA的表达分析
3 讨 论



本文编号：3843580