人热休克蛋白gp96基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达与纯化

发布时间：2023-11-04 15:43

　　热休克蛋白gp96是热休克蛋白 90家族成员 ,能够引起非特异性和特异性免疫反应。得到大量高纯度的蛋白质是研究开发gp96的关键。然而重组的gp96容易在E .coli中降解 ,并在一定条件下形成多聚体。实验先将人gp96基因克隆到pET 30a载体上并在E .coliBlstar中表达 ,再经过亲和层析、阴离子交换、分子筛分别纯化gp96。最终去掉了大部分的降解片段和多聚体 ,得到一定量的可溶性gp96 ,为进一步研究其结构和功能打下一定的基础

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 菌株和质粒
    1.2 主要试剂和仪器
    1.3 重组子的克隆
        1.3.1 引物设计:
        1.3.2 全长gp96基因的克隆:
    1.4 全长gp96的表达
    1.5 gp96的纯化
        1.5.1 菌体裂解:
        1.5.2 gp96的离子交换亲和层析:
        1.5.3 gp96的分子筛层析:
    1.6 Western blot检测 gp96
2 结果和分析
    2.1 gp96基因的表达
    2.2 20QE阴离子交换柱纯化gp96蛋白
    2.3 分子筛纯化人的gp96
    2.4 纯化后gp96的Western杂交和SDS-PAGE
3 讨论



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