人骨桥蛋白表达载体的构建、表达产物的分离纯化、多克隆抗体的制备及其初步应用

发布时间：2023-12-23 20:48

　　目的 构建重组人骨桥蛋白(recombinant human osteopontin，rhOPN)表达载体，诱导表达并对表达产物进行分离纯化。制备多克隆抗体并分离纯化，建立双抗夹心酶联免疫吸附实验(Sandwich enzyme linked immunoabsorbent assy，Sandwich ELISA)的方法。方法 收获培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)，提取总RNA，进行RT-PCR获得人骨桥蛋白的cDNA，经BamHI／SalI双酶切，得到插入片段。同样用双酶切处理载体DNA，连接插入片段和载体，转化到大肠杆菌中。挑选阳性克隆经酶切鉴定和测序后，进行诱导表达。用Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化融合蛋白，并用PreScission Protease进行裂解。用裂解后的rhOPN作为抗原免疫家兔，制备多克隆抗体，结合离子交换层析方法和饱和硫酸铵沉淀法纯化IgG，用过碘酸钠改良法进行偶联IgG与辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)，并建...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 (人骨桥蛋白表达载体的构建、表达及表达产物的分离纯化)
    摘要(中文)
    摘要(英文)
    引言
    材料与方法
    结果
    讨论
    结论
    参考文献
第二部分 (多抗的制备、纯化及其初步应用)
    摘要(中文)
    摘要(英文)
    引言
    材料与方法
    结果
    讨论
    结论
    参考文献
本课题的进一步设想
致谢
附录
    个人简历
    硕士研究生在读期间发表的论文
综述(人骨桥蛋白与肿瘤发生及转移之间关系的研究进展)
    一、 骨桥蛋白的结构特点
    二、 人骨桥蛋白的生物学特点及意义
    三、 OPN的受体
    四、 与OPN有关的信号转导途径
    五、 OPN与肿瘤转移的研究现状
    参考文献



本文编号：3874290