人用猪源性生物制品中猪细小病毒检测方法的建立

发布时间：2024-02-20 01:47

　　为保证人用猪源性生物制品的的质量和安全性，有必要对潜在污染的相关病毒进行检测。本论文旨在建立猪细小病毒(PPV)的分子生物学及血清学检测方法，并对相关生物材料进行检测。 通过GeneBank查出所有已发表的PPV基因组序列，其它细小病毒科细小病毒属病毒及其它猪源性病毒基因组序列，利用DNAStar软件进行序列同源性分析，利用Primer primier5.0及Oligo6.0引物设计软件按照引物设计原则设计一对针对PPV的特异引物，能够扩增出一条531bp的特异片段，经方阵滴定法确定了PCR检测的最佳条件，经过寡核苷酸探针对PCR产物进行斑点杂交鉴定，并对特异片段连接pGEM-T-easy载体，通过对于重组质粒测序结果进行软件分析证明为PPV的特异片段。对已知TICD₅₀为10^3.6的病毒培养物提取模板以10倍等级倍比稀释，进行PCR扩增，以鉴定PCR方法的敏感性，我们建立的PCR方法所能检测的最小TCID₅₀值为0.398。通过对来自北京各大屠宰场的猪源性脏器及建立的PPV—猪肾组织混合感染PK-15细胞模型进...

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1一3上毒前后PK一15上毒后的P-K15细胞细胞培养形态对比

中国药品生物制品检定所硕士研究生论文实验结果一、PPV于PK一15细胞培养结果(见图1一3)未上毒的正常P-K15细胞图1一3上毒前后PK一15上毒后的P-K15细胞细胞培养形态对比正常PK一15细胞为梭形，规则，上毒后的PK一15细胞呈隆起、固缩、溶解等病变。二、Reod一Mu....

图1一5Mg++浓度滴定结果

8、1.ommol/L/10017、2.smmol/L/10一39、1.smmol几/10一318、2.smmol/L/10一22、引物浓度的优化:(见图1一6)分设0.05umol/L、0.1umol/L、0.2umol/L、0.3umol/L、0.4umol几、0.5umol....

图1一7TaqDNA聚合酶滴定结果

中国药品生物制品检定所硕士研究生论文123456789lOlll2l3l4l5l6l7l8l9202l22232425图1一6引物浓度滴定结果l、0.05umol/L/10一310、0.2umol/L/10一219、0.4umol/L/10，l2、0.05umol/L/10一21....

图1一6引物浓度滴定结果

8、0.1umol/L/10017、0.4umol/L/10一39、0.2umol/L/10一318、0.4umol/L/10一23、TaqDNA聚合酶用量的优化:(见图1一7)分设l.SU、2.0U、2.5U、3.0U、3.5U五个梯度，其中以2.5一3.5U均可扩增出目的片段....

本文编号：3903652