Cu 2+ 胁迫下福寿螺谷胱甘肽S转移酶基因表达分析

发布时间：2024-03-04 02:26

　　目的分析Cu²⁺胁迫前后福寿螺谷胱甘肽S转移酶(PcGST)基因的表达规律,探讨福寿螺适应Cu²⁺的相关机制。方法 80只福寿螺随机分为4组,每组20只福寿螺, Cu²⁺胁迫浓度分别为0、 50、 100、 150μg/L。分别于Cu²⁺胁迫后的0、 1、 7、 14 d,各组随机取3只福寿螺,分离其肝脏、鳃、肾脏组织,分别提取组织中的RNA,逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR检测Cu²⁺胁迫前后PcGST m RNA的相对表达量。基于Cu²⁺胁迫下的福寿螺基因转录组筛选获得PcGST基因,构建pET-28a-PcGST重组质粒,转化至大肠埃希菌(E. coil) BL21 (DE3)感受态细胞中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分析重组蛋白表达情况。将转化菌株(含PcGST基因的E. coil)和非转化菌株(未转化的E. coil)等量分成6份,随机取3份作为Cu²⁺

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 福寿螺基本信息
    1.2 主要试剂和仪器
    1.3 Cu2+胁迫前后Pc GST mRNA的相对表达量
    1.4 Pc GST基因的克隆
    1.5 pET-28a-Pc GST质粒的构建
    1.6 Pc GST基因的原核表达
    1.7 含Pc GST基因的E.coil对Cu2+的耐受能力
    1.8 统计学分析
    1.9 伦理批准和患者知情同意
2 结果
    2.1 Cu2+胁迫下Pc GST mRNA的相对表达量
    2.2 Pc GST基因的扩增结果
    2.3 Pc GST基因的原核表达
    2.4 含Pc GST基因的E.coil对Cu2+的耐受能力
3 讨论



本文编号：3918746