乙肝缺陷病毒基因组对HBV复制影响的实验研究

发布时间：2024-03-22 18:47

　　探索以基因治疗为主要手段的抗HBV感染治疗的研究是研究热点之一。目前应用于HBV感染基因治疗方案主要有DNA疫苗、核酶、反义核酸、干扰肽及干扰蛋白、Dominant negative突变体(DN突变体)、RNAi等，体外或体内模型上均显示出有效性。但由于病毒变异，上述方法需要不断重复给药，载体的安全性、特异性、高效性和可控性等问题，上述疗法临床应用还有相当一段距离。本研究拟构建一个具有生命体特征的HBV缺陷病毒，以其干扰和抑制HBV的体内复制状况，并通过调节机体对二种病毒的免疫反应，阻断HBV在体内的复制以达到抗HBV感染的目的。 所要构建的HBV缺陷病毒的特征是：其包膜和核衣壳与HBV完全相同，基因组结构中缺失HBV基因组的S基因和Pol基因，保留HBV基因组复制和包装所需的DR1、DR2、C基因和HBV 3’末端序列，并在缺失的部位引入人免疫调节基因表达盒和增强基因组复制的肝特异性增强子序列。 具体实施过程为：制备高表达HBV S基因和Pol基因的包装细胞，为乙肝缺陷病毒的制备作准备；构建含乙肝缺陷病毒基因组的重组逆转录病毒载体和含乙肝病毒基因组的重组逆转录病毒载体...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1·10HBvro盯pMsev(neo)的醉谱分析

的EcoRI和Hpal位点中，构成重组逆转录病毒载体HBVpo峥MsCVneo。以pMSCVne。空载体为对照，快筛选取2个重组子质粒，分别用EcoRI、HPal、Ec0R1/HPal作酶切鉴定，见图1一9。选一个酶切鉴定正确的重组子用EcoRI/Hpal、xhol、BglIx、....

图I一12HBVS基因表达的Western4Blot分析

1图I一12HBVS基因表达的Western4Blot分析1:未转染细胞对照2:HBVS/pLHCX和HavPox/pMsevneo共转染后G418与3:HBVS/pLHCX转染后G418筛选的抗性细胞4:pLHCX空载体转染细胞VPol全长27O0bp，占HBv基因组的84%。....

图2一4HBvzpMsCvneo的酶切筛m:DL2000DNAMarker;

I和Hpal位点中，构成重组逆转录病毒载体HBV/PMSCVneo。以pMSCVneo空载体为对照，快筛选取2个重组子质粒，分别用EcoRFHpal作酶切鉴定，见图2一4。图2一4HBvzpMsCvneo的酶切筛选m:DL2000DNAMarker;1:digestedwithE....

图2一移码突变处的序列分析

司进行测序，测序结果用DNAsTAR软件分析。测序结果分析在455bP处出现移码突变(tttttt~橄tttt)，与正确序列相比多了一个t，移码突变处的序列分析见图2一5。图2一移码突变处的序列分析

本文编号：3934812