结核菌重组基因rBCG-Rv2029c的克隆表达及免疫原性分析

发布时间：2024-04-21 23:11

　　目的:用结核分枝杆菌特异性抗原Rv2029构建结核重组疫苗(BCG-Rv2029),在C57BL/6小鼠体内评估其免疫效应,并初步探讨其免疫机制。方法:PCR扩增基因Rv2029,构建重组质粒pMV261-Rv2029,转入卡介苗感受态细胞中,诱导表达并纯化Rv2029蛋白。以重组的rBCG-Rv2029c活疫苗为免疫原,皮下免疫C57BL/6小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血抗原特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度水平,XTT检测脾淋巴细胞抗原特异性增殖反应,流式细胞仪观察CD4⁺T和CD8⁺T细胞比例变化,IFN-γ、IL-2检测试剂盒检测细胞培养基中细胞因子表达水平。结果:成功构建重组疫苗BCG-Rv2029C,并诱导表达重组蛋白。经免疫小鼠后,重组卡介苗rBCG-Rv2029c能诱导较BCG更高的IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度水平,IgG2a/IgG1的变化提示rBCG-Rv2029c可诱导Th1型免疫反应。与BCG相比,rBCG-Rv2029c可诱导产生更强的特异性细胞增殖反应、刺激产生更多的杀伤性CD8⁺

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【部分图文】：

图1重组疫苗的鉴定Fig．1Identificationofrecombinantvaccine

图3不同时期刺激指数水平Fig．3Levelsofstimulationindexindifferentperiods

ofrecombinantvaccineNote:A.PCRproductsofRV2029;B.Identificationofthedigestedre-combinantplasmind;C.PCRproductsofrBCG-RV2029;D.Theproteinexpr....

图2重组卡介苗rBCG-R诱导的特异性抗体滴度水平Fig．2LevelofspecificantibodyafterimmunitybyrecombinantrBCG-R

本文编号：3961585