Mac-1-FP融合蛋白在CHO细胞中的表达与鉴定及CHO细胞对PMA反应的某些特点

发布时间：2024-05-15 02:34

　　Mac-1(CD11b/CD18)是位于白细胞表面参与机体防御功能及免疫反应的重要粘附分子。它由α(CD11b)和β(CD18)两个亚基以非共价键的方式缔合成异二聚体；编码CD11b和CD18的基因在人分别位于第16号和第21号染色体上。Mac-1具有两种主要功能：一是与活化的内皮细胞表面上的ICAM-1高亲和力的粘附，介导白细胞的游走与渗出。二是介导白细胞对iC₃b调理的微生物或免疫复合物的细胞毒功能。 迄今为止，Mac-1粘附功能的研究已经相当深入，但对于Mac-1的分布、贮存、转位和变构的过程，虽然文献报告很多，但由于方法学的限制，尚未见有在一个活细胞内对其全过程进行动态实时的定位定量的研究。以往文献中研究Mac-1的分布、贮存、转位的方法，主要采用的是抗体标记Mac-1，用流式细胞术测定或免疫组化技术显微镜下直接观察Mac-1的细胞内分布，但其缺点是不可能在单细胞、活细胞连续地观察，如果要研究在细胞内的走向则还需要增大细胞表面通透性，这就难免干扰了细胞的生理状态。作为一种标记物，GFP(绿色荧光蛋白)具有发光不需要底物、稳定、无毒性、分子量小、形成...

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【部分图文】：

图3pcDnb一CFP融合蛋白表达质粒的酶切鉴定PECFp一NIHindlll/KPnl双酶切ABCDEF

硕士论文Mac一1一FP肚合蛋白在CHO细施结果与讨论FP融合蛋白表达质粒的筛选和鉴定白表达质粒pCDIlb一BFp分别用Hindlll单酶切与HindllP一Nl表达载体用Hindlll和KPnl双酶切，1%的琼脂糖凝胶大小分别为:pCDllb一BFP一Hindlll单酶切8.....

图5pcDllb一cFP稳定转染CHO细胞4周时的荧光显微镜下成像

士论文Mac小FP触合蛋会在CRO如鹅稳定转染CHO细胞4周时的荧光显微镜下成像白表达质粒转染CHo细胞后，高浓度G418(1000林岁ml)筛野生型CHO细胞全部死亡，转染pCD1lb一CFP的CHO细的转染细胞继续用高浓度G418筛选3周，荧光显微镜激发能够发出青色荧光的转染....

图5pcDllb一cFP稳定转染CHO细胞4周时的荧光显微镜下成像

大学硕士论文Mac小FP触合蛋会在CRO如鹅中的b一CFP稳定转染CHO细胞4周时的荧光显微镜下成像融合蛋白表达质粒转染CHo细胞后，高浓度G418(1000林岁ml)筛选细对照组野生型CHO细胞全部死亡，转染pCD1lb一CFP的CHO细胞未死的转染细胞继续用高浓度G418筛选....

图7cHo一cDnb一CFP细胞再转染pYFI，一CD18后荧光显微镜下成像

Mac小FP触合蛋合在CH细胞再转染pYFp一CD18后荧光显微镜下融合蛋白表达质粒转染到已获得的CHo一CD0nm和492nm的荧光显微镜下观察，发现转m和492nm激发光下发出青色和黄色荧光(定表达CDIlb一CFP和YFP一CD18融合蛋白的C细胞)。

本文编号：3973771