苏云金芽孢杆菌cry基因克隆表达和质粒复制区克隆的研究

发布时间：2024-05-21 03:08

　　Bt25是我国自行分离的对小菜蛾具有高毒力的苏云金芽孢杆菌，经PCR-RFLP系统鉴定它含有cry1Aa基因。以全长基因PCR产物的粘端定向克隆的方法，设计一对特异引物，以Bt25质粒DNA为模板扩增cry1Aa全长基因。序列测定结果表明该基因编码区为3552bps，编码1183个氨基酸，分子量为133.7kDa，等电点为pI4.755。该基因序列已在GenBank注册，Accession number为AY197341，并被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Aa14。在氨基酸序列918～1180间，和以知的13种cry1Aa的11种(不包括cry1Aa9和cry1Aa13)存在22或23个氨基酸的差异(其中1094～1097的4个氨基酸无对应序列)，而这段区域和cry1Ab氨基酸序列的对应区域无差异。cry1Aa14全长基因插入Bt表达载体，获得了重组表达质粒pBYB1，转化大肠杆菌SCS110和Bt无晶体突变株HD73cry^-，经过抗性筛选、DNA酶切分析和PCR检测，证实转化成功。SDS-PAGE分析表明该基因在受体菌HD73cry

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
文献综述
    1 苏云金芽孢杆菌
        1.1 苏云金芽孢杆菌简介
        1.2 苏云金芽孢杆菌毒素
        1.3 苏云金芽孢杆菌杀虫作用机制
        1.4 苏云金芽孢杆菌的应用
    2 载体在苏云金芽孢杆菌工程菌构建中的重要位置
引言
材料和方法
    1 实验材料
    2 实验方法
        2.1 cry1Aa14基因的克隆和表达
        2.2 Bt复制区的克隆
结果与分析
    1 cry1Aa14基因的克隆和表达
        1.1 Bt25菌株形态特征
        1.2 基因型的鉴定
        1.3 cry1Aa全长基因的克隆
        1.4 cry1Aa基因的序列析
        1.5 cry1Aa14基因在Bt无晶体突变株中表达
        1.6 cry1Aa14基因表达产物对小菜蛾幼虫的生物活性测定
    2 Bt复制区的克隆
        2.1 pHT315的改造
        2.2 Bt质粒DNA文库构建
        2.3 复制区的克隆
        2.4 复制区的鉴定
        2.5 复制区序列分析
        2.6 复制区稳定性检测
讨论
结论
参考文献
英文摘要
致谢



本文编号：3979521