PhoP/PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv的构建及鉴定

发布时间：2024-12-21 20:42

　　 目的构建PhoP和PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv(以下简称H37Rv),检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株PhoP/PhoR基因的表达水平。方法提取并鉴定结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR,利用电转化技术将结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR导入H37Rv的感受态细胞中,构建PhoP/PhoR基因过表达H37Rv,应用实时荧光定量PCR检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达水平。结果成功构建PhoP/PhoR基因过表达H37Rv。应用实时荧光定量PCR检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达水平,其中在电压为2 300～2 500V的范围内,电压越高,电转化菌的PhoP/PhoR基因表达量越高。结论成功构建了PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株,以电压为2 500V电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因...

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【文章目录】：
材料和方法
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 主要试剂和仪器
    2 方法
        2.1 pMV361-Phop和pMV361-PhoR质粒的提取
        2.2 制备H37Rv感受态细胞
        2.3 重组质粒电转化导入H37Rv感受态细胞
        2.4 PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的检测及鉴定
        2.5 PhoP/PhoR基因过表达H37Rv总RNA的提取
        2.6 总RNA的反转录反应
        2.7 实时荧光定量PCR检测MTB
        2.8 统计学分析
    3 PhoP/PhoR基因过表达H37Rv质粒的提取与鉴定
    4 PhoP/PhoR基因的PCR扩增及双酶切鉴定
    5 MTB总RNA的提取及鉴定
    6 PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的Phop基因相对表达量
    7 PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoR基因相对表达量
    8 H37Rv、BCG、H37Ra的PhoP/PhoR基因相对表达量比较
结果
    1 pMV361-Phop和pMV361-PhoR质粒的提取与鉴定
    2 PhoP/PhoR基因过表达H37Rv耐药性检测
讨论



本文编号：4018878