人抗地高辛单链抗体（ADAscFv）的纯化

发布时间：2025-02-07 12:42

　　目的 刘德新等人已通过噬菌体抗体库技术绕过免疫成功克隆了人抗地高辛单链抗体(human single-chain variable fragment of anti-Dig antibody, ADAscFv)，并使其在大肠杆菌中得到可溶性表达，目前需依据抗体性质的特点进行分离与纯化。由于不同蛋白质的纯化无通用策略，给制备带来了较大难度和特殊性，本实验的目的即通过试用不同的纯化方法（盐析、阴离子交换、凝胶过滤等），探明适合纯化ADAscFv的最佳纯化方法及条件，为下一步制备诊断Dig中毒的试剂盒和探明ADAscFv对Dig中毒的拮抗作用等后续研究提供实验室依据。 方法 ①培养大肠杆菌(E.coli)HB2151，进行可溶性表达ADAscFv, 离心制备菌液上清，分别经酶联免疫吸附实验（ELISA）和聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）对表达产物进行活性及表达量的检测。②采用不同饱和度硫酸铵分级盐析法（SF）对上述表达物进行初步分离,分别用ELISA和SDS-PAGE法对回收的样品进行活性及纯度的检测，确定硫酸铵的最佳饱和度及适合的温度、沉淀所需时间等条件。③...

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
论 文
    前 言
    材 料
    方法与结果、讨论
        第一部分
        第二部分
        第三部分
        第四部分
        第五部分
    结 论
    参考文献
综 述
    正 文
    参考文献
个人简介
致 谢



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