穿膜肽EGFP的构建及其对人成熟精子的穿膜活性鉴定

发布时间：2017-06-11 01:03

  本文关键词：穿膜肽EGFP的构建及其对人成熟精子的穿膜活性鉴定，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的构建穿膜肽TAT与EGFP融合蛋白的原核表达系统,研究该融合蛋白对人成熟精子的穿膜作用和对精子运动参数的影响。方法以p EGFP-N1载体为模板,设计N端和C端含有TAT序列的引物,用PCR技术扩增TAT-EGFP和EGFP-TAT基因,扩增产物插入载体p ET28a,构建成重组质粒p ET28a-TAT-EGFP和p ET28a-EGFPTAT。将重组质粒转入大肠杆菌DE3中,IPTG诱导TAT-EGFP和EGFP-TAT融合蛋白表达。表达产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化后SDS-PAGE电泳鉴定。将融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT分别加入正常人精子中孵育,荧光显微镜观察融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT穿膜情况。结果成功构建了高表达重组质粒p ET28a-TAT-EGFP和p ET28aEGFP-TAT,纯化了分子质量约为32 k D的融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT。融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT在正常人成熟精子中有穿膜作用。不同浓度的融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT对正常人成熟精子存活率及运动参数无明显影响。结论通过对融合蛋白TAT-EGFP和EGFP-TAT表达纯化及活性分析,证实穿膜肽TAT在精子中的跨膜转运作用,为将来精子研究提供了实验基础。
【作者单位】： 江西省妇幼保健院辅助生殖中心;南昌大学第三附属医院;
【关键词】： 细胞穿膜肽 绿色荧光蛋白 精子
【基金】：江西省卫生计生委普通科技计划资助课题(20151119)
【分类号】：R321
【正文快照】： 近年来研究热点之一细胞穿膜肽(cell-penetratingpeptides,CPPs),也称为蛋白质转导域(proteintranslocation domain,PTD)或“特洛伊木马”肽(Trojan horse peptides)或转导肽(transductionpeptide)等,是一种高度阳离子短肽。穿膜肽具有强大的运载潜能[1],可以通过化学结合或基

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本文编号：440384