肠道病毒71型2C蛋白原核表达及抗体制备

发布时间：2017-06-16 22:07

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【摘要】：肠道病毒71型(EV71)的非结构蛋白2C(P2C)在病毒复制周期中起着重要的作用,制备P2C的特异性抗体,对研究P2C的生物学功能以及EV71与宿主相互作用的具体机制有非常重要的意义。实验将2C基因克隆到原核表达载体p ET-28a(+)上,在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达出重组蛋白r P2C,进一步优化原核表达条件,在温度为30℃,诱导剂IPTG浓度为1 mmol/L时,蛋白表达量最高,且主要以包涵体形式存在。直接将获得的r P2C通过SDS-PAGE分离后免疫新西兰兔,制备EV71病毒P2C的兔多克隆抗体。通过Western blot检测,该抗体在1妣10 000稀释比例下仍能很好地识别原核表达的r P2C。同时该抗体也能很好地检测到EV71感染RD细胞中的P2C。因此,实验制备出的抗P2C抗体特异性强、效价高,为后续P2C功能的研究以及EV71病毒检测提供了良好的材料。
【作者单位】： 辽宁大学生命科学学院;中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室;
【关键词】： EV病毒 C蛋白 原核表达 多克隆抗体
【基金】：辽宁省教育厅资助项目(L2012008)
【分类号】：R373
【正文快照】： EV71病毒(Enterovirus 71,EV71)是一种重要的嗜神经组织肠道病毒,主要感染5岁以下儿童,一年四季均有相应病例出现,尤其在夏秋季多发。其感染后引发疾病主要为手足口病(HFMD)和神经源性肺水肿,此外还会引起急性无菌性脑膜炎、脑干脑炎、脊髓灰质炎样麻痹等中枢神经系统疾病,甚

【共引文献】

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