结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16.3蛋白的原核表达及功能检测

发布时间：2017-06-17 04:03

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【摘要】：目的进行结核分枝杆菌小分子热休克蛋白MTB Hsp16.3原核表达载体的构建、表达、纯化并初步观察其生物学效应。方法提取临床H37Rv分离株基因组DNA,PCR扩增Hsp16.3基因,将其重组到原核表达载体Pet28a中,构建原核表达载体Pet28a-Hsp16.3,进行双酶切及测序鉴定。将测序正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE检测,同时通过镍柱纯化试剂盒纯化Hsp16.3,测定纯化后蛋白浓度,并进行Western blot法检测。将不同浓度纯化后蛋白作用小鼠腹腔巨噬细胞,实时定量PCR(qRT-PCR)检测巨噬细胞IL-10和IFN-γ的表达,同时设定空白对照组及阳性对照组。结果成功构建重组质粒Pet28a-Hsp16.3,并在E.coli BL21(DE3)中获得成功表达,通过镍柱纯化系统得到纯化Hsp16.3融合蛋白。qRT-PCR检测结果显示,不同浓度纯化后Hsp16.3蛋白作用小鼠腹腔巨噬细胞,可促进IFN-γ的产生而抑制IL-10的产生。结论成功克隆、表达和纯化了MTB Hsp16.3蛋白,Hsp16.3能促进小鼠腹腔巨噬细胞产生IFN-γ,抑制IL-10的产生。
【作者单位】： 遵义医学院免疫学教研室 贵州省免疫学研究生教育创新基地;遵义医学院医学检验系;
【关键词】： 热休克蛋白. 蛋白纯化 巨噬细胞
【基金】：贵州省科学技术基金(黔科合J字[2008]2188) 贵州省优秀科技教育人才省长基金(黔科教办[2010]04号)
【分类号】：R392.11;R378.911
【正文快照】： 结核病是一类由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)感染引起的慢性传染病。2011年我国结核病年发病人数约为90万,占全球年发病率的10.3%,位居全球第2位[1]。MTB是一种典型胞内寄生菌,感染机体后可在巨噬细胞内长期存活,故MTB在巨噬细胞中长期存活造成潜伏感染的相关

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 师长宏;江鹰;赵勇;毛峰峰;张彩琴;白冰;张海;;结核分枝杆菌Hsp16.3蛋白影响小鼠巨噬细胞自噬形成的实验研究[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年12期

2 姚楠;董江涛;徐芳;田玺泽;吴芳;章乐;吴江东;张万江;;结核分枝杆菌Hsp16.3与感染巨噬细胞凋亡的相关性研究[J];中国病原生物学杂志;2012年08期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 刘云霞;董伟杰;庹清章;刘丹霞;李微;张春军;张辉;吴芳;章乐;张万江;;结核分枝杆菌Hsp16.3对感染巨噬细胞凋亡的影响[J];石河子大学学报(自然科学版);2013年05期

2 于翔;陆佳嘉;王秦;于晓Y，

本文编号：457268