人不同孕期胎盘组织中实时荧光定量PCR内参基因的选择

发布时间：2017-06-23 05:07

  本文关键词：人不同孕期胎盘组织中实时荧光定量PCR内参基因的选择，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的比较人不同孕期胎盘组织中最常用的内参基因及其他几种管家基因mRNA表达水平的差异及稳定性,选出用于该研究的最佳内参基因。方法应用荧光实时定量RT-PCR技术检测6种管家基因[3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、β肌动蛋白(β-actin)、β2微球蛋白(β2-M)、18S核糖体RNA(18srRNA)、RNA聚合酶Ⅱ(RPⅡ)、泛素(UBC)]在早、中、晚不同孕期孕妇绒毛和胎盘组织中mRNA的表达情况,并应用geNorm程序对内参基因表达稳定性进行分析。结果在早、中、晚不同孕期的孕妇早孕绒毛或胎盘组织中内参基因GAPDH mRNA的表达水平变化最大,其中在早孕绒毛组织中表达水平最高,随着孕期的延长其表达水平逐渐降低;内参基因β-actin mRNA转录水平则呈相反的趋势变化,标本间mRNA表达水平变化亦较大;内参基因β2-M、18S和UBC mRNA表达水平在不同孕期标本间变化相对较小,其中内参基因RPⅡmRNA表达水平在不同孕期标本间变化最小。所选内参基因的表达稳定度由高到低依次为RPⅡUBC18srRNAβ2-Mβ-actinGAPDH。结论在应用荧光实时定量RT-PCR技术研究基因转录表达时,应根据研究所用的材料选择合适的内参基因;本研究中RPⅡ是可用的稳定内参基因。
【作者单位】： 西安交通大学医学院第一附属医院血液科;西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室;西安交通大学医学院长安区医院;
【关键词】： 实时定量PCR 内参基因 GeNorm程序分析 不同孕期 胎盘组织
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.30800909)~~
【分类号】：R346
【正文快照】： 实时荧光定量PCR(QPCR)是近年来最常用的快速、准确定量检测低丰度mRNA的敏感方法。使用内源性管家基因(housekeeping gene)作为内参照物进行校正和标准化,以去除不同标本在RNA的产量、质量以及逆转录效率上可能存在的差别而获得目标基因特异性表达的真正差异,是QPCR中常采用

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