脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中A群游离多糖含量测定方法的建立

发布时间：2017-06-26 12:22

  本文关键词：脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中A群游离多糖含量测定方法的建立，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的建立脑膜炎球菌结合疫苗中A群游离多糖含量的定量检测方法,并进行验证。方法采用高效阴离子色谱-电导法(high-performance anion-exchange chromatography with conductivity detection,HPAEC-CD),分析柱:IonPacTMAS11 Analytical(4 mm×250 mm),22 mmol/L Na OH流洗,流速为1 ml/min,25μl自动进样,电导检测。筛选样品的氧化反应最佳温度、双氧水浓度及干烤时间,确定HPAEC-CD的检测限和定量限,并进行专属性、准确性及精密度验证。应用建立的方法检测3批多糖蛋白结合物原液A-破伤风类毒素(A-tetanus toxoid,A-TT)多糖及游离多糖含量,并与《中国药典》三部(2010版)附录ⅦA磷测定法中的传统比色法进行比较;同时检测3批A、C群及A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的多糖及游离多糖含量。结果确定样品的氧化条件为:100μl/ml H2O2,220℃干烤90 min。磷标准品在0.1~1μg/ml范围内,峰面积和浓度线性关系良好(r=0.999 877);TT、C-TT、W-TT及Y-TT对测定无干扰;该方法的检测限为0.007μg/ml,定量限为0.024μg/ml;A群脑膜炎球菌多糖原液的加样回收率在97.56%~102.95%之间;重复性及不同操作者间的精密度试验结果 RSD均小于5%。A-TT的多糖含量及游离多糖含量与传统比色法测定结果差异较小;3批A、C群及A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗的多糖含量均符合《A、C群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》及《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》要求,游离多糖含量分别为24.31%、23.04%、24.44%和19.07%、17.80%、19.46%。结论采用H2O2氧化处理,HPAEC-CD检测,除了能对脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中微量A群多糖含量进行定量检测外,还能够进行游离多糖含量的检测。该方法灵敏度和精密度良好,操作简单、安全,对操作者及环境提供了保护。
【作者单位】： 北京微谷生物医药有限公司;北京生物制品研究所有限责任公司;
【关键词】： 过氧化氢 高效阴离子色谱-电导法 脑膜炎奈瑟菌 结合疫苗 多糖 含量测定
【基金】：重大新药创制科技重大专项(2010ZX09401-303-308)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 与脑膜炎球菌多糖疫苗相比,结合疫苗的多糖剂量较低[1],而未与载体蛋白结合的游离多糖含量是评价结合疫苗的一项重要指标,其含量不应超过总多糖含量的20%。这使微量多糖含量的测定成为首要解决的任务。采用WHO推荐使用的高效阴离子-液相脉冲安培检测法,即高效阴离子色谱-电导

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