人外周血来源的过度生长内皮细胞的分离、培养及鉴定

发布时间：2017-06-29 08:19

  本文关键词：人外周血来源的过度生长内皮细胞的分离、培养及鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：与内皮干细胞相比,外周血来源的过度生长内皮细胞(blood outgrowth endothelial cells,BOECs)富含血管新生和细胞黏附所需的蛋白,生物学特性更像内皮细胞;同时它克服了成熟的人脐血内皮细胞体外培养扩增量少和表型易发生改变的缺点,成为一种研究血管异常相关性疾病的新工具。本研究旨在建立从人外周血中体外培养、扩增BOECs,并进行鉴定的方法。采集外周血,梯度离心获得单个核细胞,接种于胶原铺板的细胞培养皿上,EGM-2培养4周。观察BOECs的形态学特征,流式细胞术分析细胞表面抗原表达。血管性血友病因子(von Willebrand factor,v WF)多聚体分析BOECs上清v WF多聚体分布,荧光共聚焦显微镜鉴定细胞内v WF的贮存及v WF的刺激分泌。结果表明,体外诱导培养4周左右,出现克隆性生长的细胞集落,BOECs呈现"铺路石"样外观。经过3周左右的扩增后,过度生长的内皮细胞表达CD31、CD34、EPCR阳性,CD14、CD45、CD133阴性。收集BOECs上清,进行v WF多聚体分析,与正常血浆相比v WF多聚体分布无差异。在荧光共聚焦显微镜下观察,BOECs内贮存v WF,加入佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)刺激后,细胞内v WF增加,细胞表面可见v WF丝状结构。结论:本研究运用该实验方法在国内首次实现了人BOECs的体外培养、扩增及鉴定。该方法可以为血管性血友病病人发病机制的探讨提供天然的细胞模型,并可能为病人基因治疗提供新工具。
【作者单位】： 苏州大学附属第一医院、江苏省血液研究所、卫生部血栓与止血重点实验室、血液学协同创新中心;江苏省苏北人民医院血液科;
【关键词】： 外周血 过度生长内皮细胞 细胞表型 血管性血友病因子
【基金】：2012年度江苏省普通高校研究生科研创新计划(832) 江苏省科教兴卫工程-临床医学中心(ZX201102)资助
【分类号】：R329.2
【正文快照】： Isolation,Culture and Characte rization of Outgrowth Endothe lialCe lls from the Human Pe riphe ral BloodYIN Jie1,2▲,MA Zhen-Ni1▲,ZHAO Xiao-Juan1,RUAN Chang-Geng1*1Jiangsu Institute of Hematology,Key Laboratory of Thrombosis and Hemostasis of Ministry

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