α1抗胰蛋白酶突变体ATZ过表达增强细胞自噬水平

发布时间：2017-06-29 20:19

  本文关键词：α1抗胰蛋白酶突变体ATZ过表达增强细胞自噬水平，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的观察α1抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,AAT)Z型突变体(α1-antitrypsin Z variant,ATZ)表达对细胞自噬水平的影响,探讨ATZ细胞毒作用的可能机制。方法体外培养人胚肾细胞株HEK 293T并转染ATZ真核表达质粒,利用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,免疫荧光染色观察LC3的细胞定位,real-time PCR法检测自噬相关基因Atg5、Atg12和Beclin1的变化,DAB染色观察ATZ过表达对细胞形态的影响。结果与转染空质粒对照组相比,ATZ过表达促进细胞自噬的标志分子LC3由LC3-Ⅰ转变为LC3-Ⅱ,p62水平降低;而经自噬抑制剂氯化铵处理后,ATZ过表达细胞中出现LC3点状聚集,p62水平增加;同时,ATZ过表达明显增加自噬相关基因Atg5、Atg12的mRNA水平,而对Beclin1无明显影响;少量表达ATZ的细胞形态基本正常,细胞中LC3形成点状聚集;反之,过度表达ATZ的细胞核变小、固缩甚至消失,无LC3-Ⅱ表达。结论过表达ATZ通过增加Atg5和Atg12表达激活自噬,这可能与其细胞毒性有一定相关性。
【作者单位】： 安徽医科大学药学院;安徽医科大学生物药物研究所;安徽医科大学基础医学院;
【关键词】： α抗胰蛋白酶Z型突变体 自噬 p LC Bec-lin 细胞毒性
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No 81100247,81302755,91129729)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： α1抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,AAT)属于丝氨酸蛋白酶超家族成员,由肝细胞合成和分泌,可以抑制包括胰蛋白酶、糜蛋白酶、凝血酶等多种蛋白酶活性,但其主要作用是通过血液循环扩散到肺部,保护肺组织弹力纤维免受中性粒细胞弹性蛋白酶的水解和破坏[1]。AAT缺乏症是一种常染色体

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