登革病毒1型E蛋白第三结构域的原核表达及其免疫原性

发布时间：2017-07-02 00:04

  本文关键词：登革病毒1型E蛋白第三结构域的原核表达及其免疫原性，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的在大肠埃希菌中表达登革病毒(Dengue virus,DENV)1型(DENV-1)E蛋白第三结构域(EⅢ),并分析重组蛋白的免疫原性。方法利用PCR技术从质粒p MD-D1pr M/E中扩增DENV-1的EⅢ序列,插入原核表达载体p ET-32a(+),构建重组表达质粒p ET-D1EⅢ,转化至E.coli Rosetta2(DE3)中,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经亲和层析和阴离子交换层析纯化后,免疫家兔,制备多克隆抗体,采用Western blot法检测抗体的特异性,间接ELISA法检测抗体滴度,蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)检测中和抗体效价。用纯化的重组蛋白免疫经腹部皮下多点注射BALB/c小鼠3次,末次免疫2周后,用DENV-1(Hawaii株)经脑内攻击,分析重组蛋白对小鼠的免疫保护力。结果重组原核表达质粒p ET-D1EⅢ经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为33 000,主要以可溶性形式表达,占重组菌裂解上清蛋白量的52.37%;纯化的纯度可达90%以上,浓度达2 mg/ml;制备的多克隆抗体特异性强,效价高;重组蛋白能保护57.1%的小鼠免受致死剂量DENV的攻击。结论成功在E.coli Rossetta2(DE3)中高效表达了DENV-1 EⅢ蛋白,纯化的重组蛋白免疫家兔获得的多克隆抗体具有较强的特异性和较高的效价,且在小鼠免疫保护试验中显示出较好的保护力。本实验为进一步研究E蛋白的功能和登革新型疫苗的开发奠定了基础。
【作者单位】： 成都生物制品研究所有限责任公司;
【关键词】： 登革病毒 E蛋白 第三结构域 原核细胞 基因表达 免疫原性 免疫保护力
【基金】：国家高技术研究发展计划(2012AA02A401)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 登革病毒(Dengue virus,DENV)是一种蚊媒传播的病原体,属于黄病毒科,黄病毒属,分为4个典型的血清型(DENV-1、DENV-2、DENV-3、DENV-4)。DENV感染可引起人的登革热(Dengue fever,DF)、登革出血热(Dengue hemorrhagic fever,DHF)和登革休克综合征(Dengue shock syndrome,DSS)。

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本文编号：507895