重组人肠道病毒71型疫苗效价测定方法建立及免疫原性研究

发布时间：2017-07-02 03:09

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【摘要】：目的:建立重组人肠道病毒71型(EV71)疫苗效价测定方法以及免疫原性研究。方法:将BALB/c小鼠按不同周龄、免疫途径和免疫剂量分组,共5组,分别于d天免疫,14、21、28 d采血,采用经典微量细胞病变法进行EV71中和抗体阳转率的检测。另外将6~8周龄小鼠分成6组(10只·组-1),剂量范围(1~0.0312μg),0 d免疫,28 d采血进行中和抗体效价测定,同时取脾淋巴细胞采用ELISPOT法测定经体外刺激分泌IFN-γ的水平,并取细胞上清液采用ELISA法测定分泌IFN-γ,IL-2和IL-4的水平。结果:通过比较各组血清中和抗体阳转率可以得出:效价测定最佳条件为:6~8周龄雌性BALB/c小鼠,免疫途径为腹腔注射,0 d免疫,28 d采血,剂量范围0.5~0.0039μg。BALB/c小鼠经1次免疫后,EV71疫苗组小鼠血清中和抗体效价呈剂量效应关系,所有EV71疫苗组小鼠脾淋巴细胞分泌的IFN-γSFC值均显著高于佐剂组(P0.01);EV71疫苗组分泌IFN-γ和IL-2水平显著高于佐剂组(P0.05),并且EV71疫苗组也能分泌一定量的IL-4。经统计分析,ELISPOT法与ELISA法检测IFN-γ水平的结果高度相关(r=0.751)。结论:建立了一种重组肠道病毒71型疫苗效价测定的方法,EV71疫苗能够使BALB/c小鼠产生具有剂量效应关系的体液免疫反应,并且还能诱导BALB/c小鼠脾淋巴细胞产生特异性IFN-γ、IL-2和IL-4细胞免疫反应的应答,为后续的EV71疫苗研发及质量控制提供了一定基础。
【作者单位】： 上海泽润生物科技有限公司;
【关键词】： 人肠道病毒型 疫苗效价测定 中和抗体 体液免疫 细胞免疫 免疫原性研究
【基金】：上海市科学技术委员会"创新行动计划"项目(10431903500)资助
【分类号】：R392
【正文快照】： 手足口病(Hand-foot-mouth disease,HFMD)是儿童常见病,多种肠道病毒均可引起手足口病,其中以肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)最为常见。EV71属于小RNA病毒科肠道病毒属,为危害程度仅次于脊髓灰质炎病毒的嗜神经性肠道病毒[1]。EV71导致的手足口病

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 毛群颖;何鹏;于祥;李楠;郝春生;高强;董承红;梁争论;李凤翔;沈心亮;王军志;;人肠道病毒71型中和抗体检测方法的实验室评价[J];中国生物制品学杂志;2010年08期

2 毛群颖;郭增兵;郝春生;于丹;高帆;董承红;安文琪;高强;谢忠平;李秀玲;梁争论;;肠道病毒71型中和抗体检测用标准病毒候选株的筛选及制备[J];中国生物制品学杂志;2012年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王文广;黄晓燕;徐娟;孙晓梅;代解杰;李琦涵;;EV71可感染幼龄中缅树，

本文编号：508348