外源性ATP诱导PC12细胞的膜孔形成

发布时间：2017-07-02 22:06

  本文关键词：外源性ATP诱导PC12细胞的膜孔形成

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【摘要】：背景长期以来三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate, ATP)一直被为是细胞能量供应和利用的物质形式。但近年来越来越多的实验表明,胞外高浓度ATP是一种细胞死亡因子。最近的文献指出膜的通透性随着ATP浓度和作用时间的增加发生了质的变化,低于900D的分子和离子均可通透,导致细胞水肿,空泡形成、凋亡和坏死。然而胞外高浓度ATP对PC12细胞的影响及其机制却罕有研究报告。目的观察外源性三磷酸腺苷(ATP)可否诱导体外培养的PC12(pheochromocytoma cell lirie,PC12)细胞的膜孔形成,明确可能的关键分子靶标。方法PC12细胞经神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导分化成神经元细胞。(1)取对数生长期状态良好的细胞,随机分为4组：即正常对照组(0mmol/L ATP组),1 mmol/L ATP组,3 mmol/L ATP组,5 mmol/L ATP组。不同浓度ATP作用后,倒置显微镜下观察各组细胞形态变化、CCK-8检测细胞存活率和酶标仪检测荧光摄取强度。Real-Time PCR和Western Blotting检测P2X7受体和Panx 1 mRNA和蛋白表达。(2)将对数生长期的PC12细胞随机分为7组：正常对照组、ATP损伤组、亮蓝G (Brilliant Blue G,BBG,P2X7受体拮抗剂)组、BBG+ATP组、生胃酮(carbenoxolone,CBX,pannexin1拮抗剂)组,CBX+ATP组,BBG+CBX+ATP组。用CCK-8检测细胞存活率和酶标仪检测荧光摄取强度。数据采用Prism统计软件进行分析。结果1.ATP对PC12细胞形态和活力的影响ATP (1 mmol/L,3 mmol/L,5 mmol/L)作用3 h,可见随着ATP浓度升高PC12细胞变圆、脱壁细胞增多；当ATP浓度为3 mmol/L或5 mmol/L时,PC12细胞活力较对照组显著下降(P0.05)。2.ATP诱导PC12细胞的膜孔形成不同浓度的ATP (0,1,3,5mmol/L)作用1 h,PC12细胞摄入YO-PRO-1的荧光强度随着浓度增加而增加；同一浓度的ATP作用不同时间(15,30,60min),随着时间的增加胞内的荧光强度也增加。3.BBG和CBX对ATP诱导的细胞活力和膜孔形成的影响BBG预处理使ATP可明显拮抗ATP引起的细胞活力下降和胞内荧光强度增强(P0.05),而CBX预处理不改变ATP引起的细胞活力和胞内荧光强度的变化(P0.05)。4.ATP对P2X7 R和Panx 1的mRNA和蛋白表达的影响ATP作用3 h,使PC12细胞P2X7受体的基因和蛋白表达明显升高(P0.05),而Panx1的基因和蛋白变化无明显变化(P0.05)。结论ATP诱导PC12细胞的膜孔形成有浓度和时间依赖性。ATP引起PC12细胞的膜孔形成可能主要与P2X7受体的表达和激活有关。
【关键词】：PC12细胞 膜孔 嘌呤能P2X_7受体 三磷酸腺苷(ATP) 亮蓝G
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：Q25
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-21
• 结果21-26
• 讨论26-28
• 展望28
• 小结28-30
• 附图30-32
• 参考文献32-35
• 综述：Pannexin 1通道蛋白对P2受体的激活作用35-48
• 参考文献45-48
• 附录：中英文缩写一览表48-49
• 攻读学位期间发表文章情况49-50
• 致谢50-51
• 个人简历51

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本文编号：511431