不同浓度血管紧张素Ⅱ诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞的定向分化

发布时间：2017-07-05 08:19

  本文关键词：不同浓度血管紧张素Ⅱ诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞的定向分化

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【摘要】：背景:血管紧张素Ⅱ诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞定向分化的实验研究还较少,目前对于这种新的诱导剂在实验应用中没有一个统一的浓度标准,所以诱导结果有一定的差异。目的:探讨血管紧张素Ⅱ诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的最佳浓度。方法:采用密度梯度离心+贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,将第3代骨髓间充质干细胞分为0.05,0.1,0.2,0.5μmol/L血管紧张素Ⅱ组和对照组,血管紧张素Ⅱ各组接种后24 h加相应的诱导剂诱导24 h后,完全培养液连续培养4周,对照组只用完全培养液培养。采用MTT法检测各组第1,3,5,7天的吸光度值,计算各诱导组的细胞增殖抑制率。不同浓度血管紧张素Ⅱ诱导第1,4周时,免疫荧光细胞化学染色法检测心肌特异蛋白c Tn T、β-MHC的表达,RT-PCR检测各组诱导培养4周时心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2-5的表达。结果与结论:各诱导组间的细胞增殖曲线相似,第5天0.05μmol/L血管紧张素Ⅱ组细胞增殖抑制率开始出现负值,与其他组比较差异有显著性意义(P0.05)。第5,7天0.1μmol/L血管紧张素Ⅱ组细胞增殖抑制率明显低于0.2,0.5μmol/L血管紧张素Ⅱ组(P0.05)。经4种浓度血管紧张素Ⅱ诱导的骨髓间充质干细胞均表达心肌特异蛋白c Tn T、β-MHC,对照组阴性。诱导培养1周,0.5μmol/L血管紧张素Ⅱ组c Tn T、β-MHC蛋白阳性表达率明显高于0.05μmol/L组(P0.05)。诱导培养4周,0.1μmol/L血管紧张素Ⅱ组的c Tn T、β-MHC蛋白阳性表达率与0.2μmol/L血管紧张素Ⅱ组差异无显著性意义(P0.05)。RT-PCR检测各组骨髓间充质干细胞经不同浓度血管紧张素Ⅱ诱导培养4周后心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2-5均有表达,对照组阴性。结果表明经血管紧张素Ⅱ诱导的骨髓间充质干细胞表达心肌特异蛋白c Tn T、β-MHC及心肌特异转录因子GATA-4、Nkx2-5,诱导分化适宜浓度为0.1μmol/L。
【作者单位】： 山西医科大学第二医院心胸外科;
【关键词】： 骨髓 间质干细胞 肌细胞 心脏 血管紧张素Ⅱ 干细胞 骨髓干细胞 心肌样细胞 诱导分化
【基金】：山西省科技攻关项目资助(20120313021-3) 山西省留学归国人员科研项目资助(2012091)~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 0引言Introduction心肌细胞属于终末细胞,坏死后无法再生,所以对于缺血性心脏病的治疗存在一定的难度。但是,近年来基于骨髓间充质干细胞进行心肌修复的研究已经有所成就[1-7],骨髓间充质干细胞已成为心肌组织工程中最有潜能的种子细胞。大量体外实验已经表明大鼠骨髓间充质干

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本文编号：521190