STZ诱导糖尿病小鼠模型睾丸组织中NGF、VEGF表达变化

发布时间：2017-07-06 10:00

  本文关键词：STZ诱导糖尿病小鼠模型睾丸组织中NGF、VEGF表达变化

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【摘要】：目的:通过观察链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导糖尿病小鼠模型睾丸组织中神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达与分布情况的变化,并探究睾丸组织中NGF与VEGF表达之间的关系,为治疗糖尿病致睾丸功能障碍等疾病提供了理论基础及新的治疗方向。方法:选用清洁级4周龄健康雄性C57BL/6小鼠50只,体重18~20g,购自河北医科大学动物实验中心。适应性生长1周,实验动物随机分为A组、B组:A组25只C57BL/6小鼠和B组25只C57BL/6小鼠。将C57BL/6小鼠禁食8小时后称取体重,A组按照200mg/Kg的剂量腹腔注射配制好的STZ溶液(用0.l mol/L无菌、p H 4.4柠檬酸缓冲液配制,经0.2μm微孔滤膜过滤灭菌),B组腹腔注射等剂量p H 4.4柠檬酸缓冲液。注射STZ一周后尾静脉取血监测C57BL/6小鼠的血糖变化,及时观察C57BL/6小鼠的体重变化、尿量变化和饮食状况。C57BL/6小鼠出现多饮、多食、多尿,体重减轻,血糖高于11.1mmol/L即为糖尿病小鼠模型制备成功。A组成模20只,成模率80%。A组中随机选取18只继续进行试验,分为糖尿病组(DM Group)。B组中随机选取18只,为对照组(Control Group)。分别在糖尿病小鼠模型制备成功后第8周、第12周、第20周末随机取两组小鼠各6只,颈椎脱臼法处死小鼠,解剖取睾丸组织,置入10%福尔马林(4%甲醛)固定,用于石蜡包埋制备组织切片。分别行HE染色、免疫组化染色,通过免疫组化方法检测小鼠睾丸组织中NGF、VEGF表达情况。阳性对照由试剂公司提供,应用PBS代替一抗的组织切片做阴性对照,光镜下阳性部位为棕黄色,细胞核呈淡蓝色。免疫组化结果应用NDP数字病理扫描仪采集图像,每张切片睾丸范围内随机选取曲细精管分布均匀的5个视野(400×)作为观察区,并用Image-Pro Plus6.0图像分析软件测量积分光度值(Integrated optical density IOD),以各组的均值和标准差进行比较。结果:1小鼠的一般状况糖尿病组小鼠实验进程中,逐渐表现出被毛蓬松,污秽无泽,易脱落,活动减少,明显多饮、多食、多尿,体重较对照组减轻明显,血糖≥11.1mmol/L,明显高于对照组(P0.01)。对照组小鼠反应灵敏、精神状态良好,动作自如、活跃,毛发光亮顺滑。2小鼠体重及血糖变化糖尿病组小鼠在造模成功后就出现血糖异常症状(血糖≥11.1mmol/L),为13.74±2.71mmol/L,对照组血糖在正常水平为4.37±0.89mmol/L,两组具有极其显著的差异(P0.01)。3糖尿病小鼠睾丸组织形态改变睾丸组织切片HE染色后,光镜观察结果显示,糖尿病组曲细精管萎缩,各级精母细胞数量减少,曲细精管基膜变薄、破损、缺失。生精上皮结构排列紊乱,生精细胞脱落,曲细精管管腔内精子减少,支持细胞出现变性、空泡化。个别曲细精管仅见紧贴基膜的支持细胞及精原细胞,而其余各级精母细胞及精子减少或消失,表现为生精障碍。睾丸组织中间质组织增生,毛细血管管腔闭塞并附血栓。间质细胞数目减少,胞质浓缩,细胞核扁圆或椭圆形且核浓染,细胞胞质内还可见空泡。4免疫组织化学检测结果在两组小鼠睾丸组织中均可发现NGF、VEGF表达的阳性颗粒,NGF的免疫复合物位于Sertoli支持细胞的细胞核,次级精母细胞的细胞质,精子细胞的类圆形泡状结构中。在实验组中,随着试验周数的增加,小鼠睾丸内的NGF明显呈下降趋势,差异有统计学意义(P0.05);而在对照组中,随着试验周数的增加,NGF无明显变化,差异无统计学意义(P0.05)。在周龄相同的小鼠中,实验组较对照组睾丸内的NGF降低,两组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。小鼠睾丸内的VEGF免疫组化复合物只位于Leydig和Sertoli细胞内。在实验组中,随着试验周数的增加,小鼠睾丸内的VEGF明显呈下降趋势,且差异有统计学意义(P0.05)。而在对照组中,随着试验周数的增加,VEGF无明显变化,差异无统计学意义(P0.05)。在周龄相同的小鼠中,实验组较对照组VEGF降低,且差异有统计学意义(P0.05)。5 VEGF、NGF的相关性小鼠睾丸组织内VEGF与NGF水平在相关性分析中,存在强正相关性(r=0.778,P0.01)。结论:研究成果表明,在糖尿病小鼠睾丸组织内,曲细精管受损,各级精母细胞丢失。糖尿病小鼠睾丸内VEGF和NGF表达水平均降低,同时伴随细胞凋亡增加和睾丸组织损伤。证实睾丸中NGF及VEGF表达随糖尿病病程进展呈下降趋势,进而推测糖尿病是睾丸肿瘤与睾丸生殖功能障碍的病因之一,为糖尿病引起的睾丸肿瘤与生殖功能障碍的发病机制提供新的思路和理论依据。
【关键词】：链脲佐菌素 糖尿病小鼠 睾丸 免疫组化 神经生长因子 血管内皮生长因子
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R-332
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-19
• 结果19-21
• 附图21-24
• 附表24-27
• 讨论27-30
• 结论30-31
• 参考文献31-35
• 综述 糖尿病睾丸损伤的病理变化与防治35-47
• 参考文献43-47
• 致谢47-48
• 个人简历48

【参考文献】

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本文编号：525681