Dvl1及其突变体腺病毒载体的构建与在MSCs中表达鉴定

发布时间：2017-07-07 13:12

  本文关键词：Dvl1及其突变体腺病毒载体的构建与在MSCs中表达鉴定

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【摘要】：Dvl1及其结构缺失突变体ΔDIX(dsh and axin)和ΔDEP(dsh,Egl-10 and pleckstrin)腺病毒载体的构建并验证其在MSCs(mesenchymal stem cells)中的表达情况。将目的基因定向克隆至pAdTrack-CMV穿梭载体上,并经PmeⅠ线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒同源重组,获得重组腺病毒载体,在QBI-293A细胞中包装及扩增,实时荧光定量PCR和Western bolt验证Dvl1在MSCs中的表达情况。经PCR、PacⅠ单酶切鉴定及测序分析,成功构建Ad-Dvl1、Ad-ΔDIX和Ad-ΔDEP腺病毒载体,目的基因序列与GenBank报道一致,并选出150 MOI为最适感染MSCs的感染复数,成功构建了Ad-Dvl1、Ad-ΔDIX和Ad-ΔDEP腺病毒载体,并获得高滴度的病毒子,qPCR和Western blot证实Dvl1在MSCs中高表达并增加了β-catenin在细胞中的累积,为进一步研究Dvl1在MSCs迁移过程的作用奠定了基础。
【作者单位】： 苏州大学基础医学与生物科学学院 江苏省干细胞研究重点实验室;
【关键词】： 间充质干细胞 腺病毒载体 Dvl
【分类号】：R346
【正文快照】： Dishevelled(Dsh/Dvl)由Fahmy和Fahmy(1959)在研究果蝇体轴的定向和翅毛的发育过程中发现并鉴定。在脊椎动物中Dvl有三种亚型分别为Dvl1、Dvl2和Dvl3,三种亚型在胚胎及多种组织中均有表达(Bartis et al.,2013)。研究表明Dvl是细胞质中的多功能蛋白,在Wnt信号通路激活过程中Dvl

【参考文献】

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本文编号：530328