大鼠Ⅰ型肺泡上皮细胞的分离、培养及生物学特性研究

发布时间：2017-07-14 02:08

  本文关键词：大鼠Ⅰ型肺泡上皮细胞的分离、培养及生物学特性研究

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【摘要】：目的改良细胞分离方法,得到高纯度的原代Ⅰ型肺泡上皮细胞(ATⅠ)并进行培养,初步观察其生物学特性。方法采用SPF级SD大鼠,通过酶消化法、IgG贴壁法和免疫磁珠法获得高纯度ATⅠ并进行培养,采用台盼蓝染色计算细胞活力,免疫荧光DAPI法鉴定细胞纯度和表型,倒置显微镜观察细胞生长规律,计数法绘制细胞生长曲线。结果每只体重120g左右的SD大鼠可获得(2.1±0.5)×106个ATⅠ,细胞活力为93.8%±1.6%,细胞纯度为91.0%±0.6%。培养3d后细胞完全黏附、伸展,培养7d后汇合形成单层扁平状。免疫荧光检测显示,培养的原代细胞水通道蛋白5(AQP5)和小窝蛋白1(Cav-1)呈阳性表达,表面活性蛋白C前体(pro-SPC)呈阴性表达。获取的ATⅠ可在体外增殖,生长曲线显示原代ATⅠ在对数增长期的倍增时间约为66h。结论改良细胞分离方法可以得到高纯度的ATⅠ,培养后细胞生长良好,可为研究以ATⅠ损伤为特征的肺部疾病提供可靠的体外模型。
【作者单位】： 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;
【关键词】： 肺泡上皮细胞 Ⅰ型 细胞分离 细胞培养技术
【基金】：国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(2012CB518104)~~
【分类号】：R329.28
【正文快照】： 肺泡上皮(alveolar epithelium)由两种细胞组成,即Ⅰ型肺泡上皮细胞(alveolar typeⅠcell,IATⅠ)和Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar typeⅡcell,ATⅡ)。传统的观点认为ATⅡ是肺泡上皮中具有生物学活性的细胞,而终末分化的ATⅠ只是被动地参与气血屏障的形成,不增殖,也不具有可塑性[1

【共引文献】

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1 兰超;李海娜;李莉;王金柱;李璐;刘兰萍;狄敏;;甲泼尼龙联合氨溴索对急性百草枯中毒家猪肺损伤的影响研究[J];中国全科医学;2014年17期

2 冯丹;徐家丽;姚尚龙;;洛沙坦通过抑制NF-κB减轻大鼠机械通气所致肺损伤[J];华中科技大学学报(医学版);2014年04期

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1 洪牮;缺血性心肌纤维化中聚合胶原对促进小鼠成纤维细胞表型转化的相关信号通路的研究[D];南京医科大学;2011年

2 武雅琴;辛伐他汀缓解缺血再灌注肺损伤的机制研究[D];南京医科大学;2012年

3 施昀;蛇床子素对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究[D];第四军医大学;2013年

4 李勇;急性肺损伤微环境对大鼠原代Ⅰ型肺泡上皮细胞增殖、表型的影响[D];第三军医大学;2014年

5 王金柱;机械通气对百草枯中毒家猪急性肺损伤的影响[D];郑州大学;2014年

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1 夏前明;肺泡上皮细胞内pH的研究进展[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);1997年04期

2 卢晓晔,黄中新,王樯;小鼠肺泡发育与肺泡上皮细胞分化的电镜观察[J];解剖学研究;2000年01期

3 袁毅君,张敏,马纲;“呼吸生理”中两个概念的辨异[J];生物学教学;2002年08期

4 李勇;杜娟;余静;王海燕;岳彩黎;曾灵;蒋建新;;大鼠Ⅰ型肺泡上皮细胞的分离、培养及生物学特性研究[J];解放军医学杂志;2014年05期

5 周彩存;肺泡钠离子和液体的吸收[J];蚌埠医学院学报;1998年03期

6 于永霞，，刘福记，苏学忠;云南树

本文编号：539239