生长期兔髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞生物学特性的比较研究

发布时间：2017-07-15 19:11

  本文关键词：生长期兔髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞生物学特性的比较研究

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【摘要】：目的建立软骨细胞体外培养模型,研究纤维软骨和透明软骨的生物学差异。方法分离4周龄雌性兔双侧髁突软骨和膝关节骨骺软骨,采用胰酶和胶原酶联合消化的方法收集软骨细胞,分别进行体外培养并连续传代至P10。使用倒置显微镜观察细胞形态;采用阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色的方法分别对髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞进行鉴定;用细胞计数的方法绘制生长曲线;运用荧光定量PCR和Western印迹技术对软骨特异性指标Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、SOX9和Aggrecan进行检测,并使用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果倒置显微镜观察示,髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞形态均会随细胞传代而发生改变,且P2代以后改变明显;基因和蛋白水平的检测均证实P2代后软骨细胞去分化明显。阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定结果均为阳性,对照组为阴性。实时定量荧光PCR和Western印迹结果证明:在纤维软骨中,Ⅰ型胶原的表达量高于透明软骨;而Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、SOX9和Aggrecan的表达量却明显低于透明软骨。结论使用本方法培养软骨细胞简单有效;髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞体外培养均存在去分化现象,且两者Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、SOX9和Aggrecan的表达存在显著差异,生物学特性并不相同。
【作者单位】： 上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院口腔外科上海市口腔医学重点实验室;
【关键词】： 兔 髁突 骨骺 纤维软骨 透明软骨 生物学特性
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81200766,81070848) 上海市科学技术委员会资助项目(08DZ2271100,114119a3800,13140902702,13XD1402300)
【分类号】：R329.24
【正文快照】： 髁突是颌面部重要的生长中心之一,主要以软骨内成骨的方式进行生长和改建。髁突软骨内成骨调控机制的研究对于临床诊治和基础研究都具有极其重要的意义。目前,国内外主要以骨骺为研究对象,对软骨内成骨相关机制进行了较为深入的研究[1],而对髁突软骨内成骨的调控机制研究较少

【参考文献】

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本文编号：545326