转录因子CREB对TNFAIP1基因调控作用的研究

发布时间：2017-07-16 22:20

  本文关键词：转录因子CREB对TNFAIP1基因调控作用的研究

  更多相关文章： TNFAIP1基因 CREB Forskolin 神经元

【摘要】：TNFAIP1是一个被鉴定为受肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的蛋白,参与了DNA复制和损伤修复、细胞凋亡、调节细胞骨架结构及某些神经退行性疾病病变过程,如:阿尔兹海默症(AD)。CREB(cAMP response element-binding protein)是一个重要的核转录因子,介导了神经系统内多条信号转导通路,在神经元的生长、发育、凋亡,以及突触可塑性和学习记忆方面有重要调控作用。在本研究中,我们检测了化学药物Forskolin、Genistein、Valproic acid和Polydatin对人神经母细胞瘤细胞系(SKNSH)内TNFAIP1基因表达的影响,发现Forskolin可以显著降低TNFAIP1基因的mRNA水平和启动子活性。而Forskolin是一种腺苷酸环化酶激活剂(Cyclic adenosine monophosphate,cAMP),能激活cAMP-CREB信号通路,因此我们进一步探究了转录因子CREB与TNFAIP1基因的调控关系。KG-501是CREB蛋白的特异性抑制剂,实验证明,它能显著增强SKNSH细胞内TNFAIP1蛋白水平。因此,当过表达外源野生型CREB时,SKNSH细胞内TNFAIP1基因启动子活性和蛋白水平显著降低,说明转录因子CREB能负调控TNFAIP1基因的表达。但是过表达突变型的CREBs133a或KCREB却不能产生类似显著效果,说明CREB的ser133磷酸化和DNA结合域在转录因子CREB调控TNFAIP1基因表达的过程中有重要作用。我们进一步通过生物信息学软件预测是否TNFAIP1基因近端启动子区域内存在CREB结合位点,结果发现在-50和-196处有两个cAMP应答元件(CRE)。将这两个CREs元件进行缺失突变后,CREB对TNFAIP1基因启动子活性的抑制作用明显减弱。并且染色体免疫共沉淀实验(ChIP)也证实,CREB能结合在TNFAIP1基因近端启动子区域-290至-5以内,且包含CREs位点。说明CREB是通过结合在TNFAIP1基因近端启动子区域内的CRE元件上负调控TNFAIP1基因的表达,并且进一步实验表明,CREB蛋白ser133的磷酸化在Forskolin下调TNFAIP1基因表达的过程中是不可缺少的。
【关键词】：TNFAIP1基因 CREB Forskolin 神经元
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R3416;Q78
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 1. 前言11-23
• 1.1 TNFAIP111-15
• 1.1.1 TNFAIP1基因11
• 1.1.2 TNFAIP1家族11-12
• 1.1.3 TNFAIP1蛋白分布与表达12
• 1.1.4 TNFAIP1功能12-15
• 1.2 CREB蛋白15-20
• 1.2.1 CREB蛋白简介15
• 1.2.2 CREB蛋白家族简介15-16
• 1.2.3 CREB相关信号通路16-17
• 1.2.4 CREB转录调控机制17-18
• 1.2.5 CREB蛋白功能18-20
• 1.3 阿尔茨海默症简介20-21
• 1.4 课题研究背景和意义21-23
• 2. 材料和方法23-41
• 2.1 仪器设备23-24
• 2.2 材料与试剂24-28
• 2.2.1 细胞株和菌株24
• 2.2.2 质粒载体和工具酶24
• 2.2.3 试剂盒和抗体24
• 2.2.4 抗体及药物24-25
• 2.2.5 其他试剂25
• 2.2.6 溶液配方25-28
• 2.3 实验方法28-41
• 2.3.1 报告基因载体构建28-29
• 2.3.2 质粒DNA中量制备29-31
• 2.3.3 细胞培养、转染及药物处理31-33
• 2.3.4 RNA提取与实时荧光定量PCR33-35
• 2.3.5 荧光素酶实验35
• 2.3.6 Western blot检测35-37
• 2.3.7 染色体免疫共沉淀（CHIP）检测37-40
• 2.3.8 数据分析40-41
• 3. 实验结果41-49
• 3.1 成功构建TNFAIP1及CREs元件缺失突变的萤光素酶报告载体41
• 3.2 Forskolin对SKNSH细胞内TNFAIP1基因mRNA水平和启动子活性的影响41-43
• 3.3 CREB对SKNSH细胞内TNFAIP1基因表达的影响43-45
• 3.4 CREB依赖CREs元件抑制TNFAIP1基因的启动子活性45-47
• 3.5 CREB能与TNFAIP1基因的近端启动子结合47-48
• 3.6 CREB磷酸化对Forskolin引发的TNFAIP1基因下调作用的影响48-49
• 4. 讨论49-51
• 参考文献51-59
• 中英文缩写表59-61
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录61-62
• 致谢62

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1 畅晓燕;核蛋白CREB的转录调控机制[J];国外医学(分子生物学分册);2002年03期

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3 毛凤霞;姚梅玲;;CREB与学习记忆及情绪关系[J];医药论坛杂志;2008年22期

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5 宋海龙;郑焱;王晓民;;CREB信号通路在神经系统中的调控及功能[J];中国生物化学与分子生物学报;2013年09期

6 刘永强;倪晓华;周丹;王鑫;郭伟伟;;人CREB4转核机制的初步研究[J];华东师范大学学报(自然科学版);2007年02期

7 ;Cyclic AMP response element binding protein(CREB) participates in the heat-inducible expression of human hsp90β gene[J];Chinese Science Bulletin;2001年19期

8 张云东;顾小红;朱佩芳;王正国;周继红;许民辉;;促肾上腺皮质激素释放激素对下丘脑神经元CREB的调控[J];重庆医科大学学报;2008年09期

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1 毛凤霞;;CREB与学习记忆及情绪关系[A];经济策论（下）[C];2011年

2 刘明月;胡园;穆丽华;黄志雄;余冰颖;刘屏;;基于CREB通路研究3,6′-二芥子酰基蔗糖的神经保护分子机制[A];第十五届中国神经精神药理学学术会议论文摘要[C];2012年

3 刘健;张涛;何秀娟;许蜀闽;王培勇;;主动脉平滑肌细胞钙信号与CREB活性的关系[A];第八次全国动脉硬化性疾病学术会议论文集[C];2005年

4 Shuaishuai Huang;Ren Yu;Ping Wang;Xue Wang;Rong Fang;Jeff X.Zhou;;CaSR-increased[Ca~(2+)]i,modulates cytoskeletal subtype genes through transcriptional regulation of CREB in cancer cells[A];华东六省一市第22届解剖与组织胚胎学学术年会暨山东解剖学会成立60周年纪念大会论文汇编[C];2013年

5 李军;曹红;李国政;连庆泉;;CREB与缺血性脑损伤[A];2008年第七次华东六省一市麻醉学学术会议暨浙江省麻醉学术年会论文汇编（上册）[C];2008年

6 Yu-xian Yan;Yong Guo;Yuan Zhang;Yue-ying Song;Yuan-wei Gong;Qi Lv;Chen-yan Wang;Xi-zheng Zhang;;Mechanical Strain regulates osteoblast proliferation through Ca~(2+)-CaMK-CREB Signal Pathway[A];第十届全国生物力学学术会议暨第十二届全国生物流变学学术会议论文摘要汇编[C];2012年

7 高亚南;高歌;龙彩瑕;李俊发;;重复性低氧对小鼠脑内CREB磷酸化及蛋白表达的影响[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年

8 胡海燕;张瑞;张永芳;夏宗勤;胡雅儿;;CREB在知母皂苷元调节M1受体中的作用[A];第九届中国中西医结合实验医学学术研讨会论文汇编[C];2009年

9 胡海燕;张瑞;张永芳;夏宗勤;胡雅儿;;CREB在知母皂苷元调节M1受体中的作用[A];中国核科学技术进展报告——中国核学会2009年学术年会论文集（第一卷·第9册）[C];2009年

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1 迈文;CREB1可致女性抑郁症[N];医药经济报;2002年

2 日信;CREB基因活化可提高记忆力[N];医药经济报;2003年

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9 刘明月;基于CREB-BDNF信号转导通路研究开心散及其主要成分3，6'-二芥子酰基蔗糖促神经保护和抗抑郁的作用机制[D];河北北方学院;2013年

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