肠道病毒属3C蛋白通过调控IRF7拮抗天然免疫的机制研究

发布时间：2017-07-18 10:11

  本文关键词：肠道病毒属3C蛋白通过调控IRF7拮抗天然免疫的机制研究

  更多相关文章： 肠道病毒 3C蛋白酶 IRF7 天然免疫

【摘要】：肠道病毒属于小RNA病毒科,肠道病毒属,其中感染人类的肠道病毒包括肠道病毒A、肠道病毒B、肠道病毒C、肠道病毒D、鼻病毒A、鼻病毒B和鼻病毒C七个种。肠道病毒(EV)是重要的呼吸道感染病原体,在患有上呼吸道感染的成人中检出率位居第4,WHO最新报道显示,70%的EV感染者是10岁以下儿童。人感染肠道病毒的临床症状表现多样,除了无症状感染外,还会引起广泛的急性疾病,如EV-A71是引起手足口病的主要病原体；柯萨奇病毒能够引起无菌性脑膜炎、胰腺炎、I型糖尿病等；脊髓灰质炎病毒会侵袭神经系统引起脊髓灰质炎；EV-D68会引起中度到重度呼吸道感染,其主要感染人群是婴幼儿和青少年；鼻病毒(RV)是引起普通感冒的主要病原体,同时是诱发哮喘的主要因素。但是,目前对于肠道病毒的治疗主要以支持治疗为主,并没有广谱有效的疫苗和特效药物。因此,阐明其致病机制从而寻找有效的抗病毒药物和治疗方法仍是亟待解决的问题。研究表明,天然免疫逃逸在EV感染致病中发挥重要作用。我们发现EV-D68感染细胞后几乎不诱导细胞因子及干扰素的产生,提示EV-D68有拮抗天然免疫的能力。2015年,science报道了一例IRF7突变的个体在感染流感病毒后,引起了严重的急性呼吸窘迫综合征,说明IRF7在机体防御病毒入侵过程中起着非常重要的作用。我们实验室前期研究结果表明,EV-A713C切割干扰素调控因子7(IRF7)拮抗天然免疫,通过序列比对发现肠道病毒属3C有相同的蛋白酶活性位点。因此,我们选取其他种的代表株,深入研究了肠道病毒属3C对IRF7的影响及调控天然免疫应答的机制,试图阐明肠道病毒属拮抗天然免疫的共性。实验结果表明,不同种肠道病毒的3C都可以通过切割IRF7而拮抗天然免疫。通过检测3C蛋白酶抑制剂和3C蛋白酶活性位点突变体对于IRF7蛋白表达的影响,发现抑制剂能够抑制3C蛋白酶对IRF7的切割。同样的,缺失3C蛋白酶活性的突变体也不能切割IRF7蛋白,表明EV 3C对IRF7的切割依赖于3C蛋白酶活性。不同于肠道病毒A在Q189位点切割IRF7,肠道病毒B、C、D和鼻病毒C切割IRF7在Q167和Q189,鼻病毒A和B除了在Q167和Q189,还在W130位点切割IRF7。利用EV-D68为代表研究IRF7影响EV复制及3C切割IRF7的意义发现EV-D68感染可以减少细胞内源IRF7表达。EV-D68感染不同细胞系后均引起IRF7蛋白表达量随着病毒感染剂量的增加而呈现出剂量依赖性降低,而IRF3、TBKl蛋白表达量没有显著变化。而用慢病毒感染细胞,敲低IRF7表达后,EV-D68复制增强。过表达IRF7可以显著抑制EV-D68复制,而IRF7的切割片段则不能抑制其复制,从而揭示了EV-D68拮抗IRF7介导的天然免疫应答机制。综上所述,不同肠道病毒拮抗天然免疫的共性是都可以通过3C蛋白酶切割IRF7并抑制IRF7介导的干扰素启动子激活功能,从而逃逸宿主天然免疫。通过研究EV 3C蛋白酶对IRF7的切割作用,揭示了EV抑制细胞天然免疫防御的机制,为阐明EV的致病机制提供理论依据。
【关键词】：肠道病毒 3C蛋白酶 IRF7 天然免疫
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 第一章 引言9-26
• 一、EV与呼吸道感染9-14
• 二、抗病毒天然免疫受体及信号通路14-21
• 三、病毒拮抗天然免疫机制研究21-23
• 四、IRF7与抗病毒天然免疫23-25
• 五、总结25-26
• 第二章 实验材料和方法26-41
• 一、实验材料26-32
• 二、实验方法32-41
• 第三章 实验结果41-57
• 1.1 EV-D68感染不引起Ⅰ型IFN应答41-42
• 1.2 EV-D68 2A不会抑制IRF7表达42-43
• 1.3 肠道病毒属3C切割IRF743-45
• 1.4 3C蛋白酶活性是切割IRF7的关键45-47
• 1.4.1 3C蛋白酶抑制剂能够拮抗3C对IRF7的切割45-46
• 1.4.2 缺失蛋白酶活性的3C突变体丧失IRF7切割活性46-47
• 1.5 EV切割IRF7位点的确定47-50
• 1.5.1 RV-C/CV-B2/PV-2/EV-D68切割IRF7在Q167/Q18947-48
• 1.5.2 RV-A/RV-B切割IRF7在Q167/Q189/W13048-49
• 1.5.3 W130位点被其他RV 3C切割49-50
• 1.6 RV 3C切割IRF7 W130依赖3C蛋白酶活性50
• 1.7 EV-D68感染促进IRF7切割50-51
• 1.8 过表达IRF7抑制EV-D68复制51-52
• 1.9 IRF7的切割片段不能抑制病毒复制52-53
• 1.10 IRF7切割片段不引起IFNβ/IFNα启动子的激活53-54
• 1.11 讨论54-57
• 参考文献57-67
• 中英文对照表67-69
• 发表文章69-70
• 致谢70

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 郝玉宾,郑金仕,张德峰,郭文潮,朱俊真,高健;应用RT-PCR法快速检测柯萨奇病毒基因[J];中国优生与遗传杂志;1998年05期

2 李颐;居丽雯;蒋露芳;沈磊;沈琦;蔡明毅;张怀庆;;2007-2010年上海市静安区儿童手足口发病情况分析和病原学研究[J];中华疾病控制杂志;2012年08期

3 ;[J];;年期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 刘路路;肠道病毒属3C蛋白通过调控IRF7拮抗天然免疫的机制研究[D];北京协和医学院;2016年

，

本文编号：557189