全骨髓贴壁法培养人骨髓间充质干细胞的改良研究

发布时间：2017-07-20 03:05

  本文关键词：全骨髓贴壁法培养人骨髓间充质干细胞的改良研究

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【摘要】：本研究旨在利用红细胞自然沉降性原理,以传统的全骨髓贴壁法为基础,探讨一种改良后简便而高效的人骨髓间充质干细胞培养方法。采用6孔板培养细胞,将骨髓标本用MSC完全培养液培养48 h,吸取上层无红细胞的上清层,置于新的培养孔以分离获取MSC。用倒置显微镜观察细胞形态及贴壁情况,记录细胞首次贴壁时间、首次传代时间,并以传统全骨髓贴壁法为对照;应用流式细胞术检测细胞周期、细胞表面标记;用油红O及碱性磷酸酶试剂盒分别对MSC成脂、成骨能力进行鉴定;应用计数板计数法描绘第1代,第3代,第5代MSC增殖曲线。结果表明,用改良法培养的MSC高表达CD90、CD105、CD13、CD44,低表达CD14、CD45、CD34;细胞周期中G0/G1期88.76%,G2/M期3.04%,S期8.2%,符合干细胞周期特征;增殖曲线呈典型"S"型;油红O与碱性磷酸酶染色均为阳性。同时与传统方法相比,改良方法的细胞贴壁率显著高于传统方法(P=0.0004),首次贴壁时间短(P0.0001)、首次传代时间短(P=0.001)。结论:骨髓标本培养48 h后的上清层中含大量贴壁活性的悬浮MSC,改良方法是一种比传统贴壁法更具有便捷、高效等优点的培养方法。
【作者单位】： 华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病学研究所;
【关键词】： 骨髓间充质干细胞 全骨髓贴壁法 改良培养方法
【基金】：国家自然科学基金项目资助(81170525)
【分类号】：R329.28
【正文快照】： 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMMSC)是干细胞家族的重要成员,具有成脂、成骨等多向分化潜能及重要的免疫调节活性,广泛应用于组织修复、移植免疫调控等临床领域。BMMSC还具有取材方便、体外传代培养易扩增、连续复制的干性、易于转染外源性基因等特点

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本文编号：565960