A群脑膜炎球菌多糖结合物原液中游离糖含量测定方法的建立及其验证

发布时间：2017-07-20 06:08

  本文关键词：A群脑膜炎球菌多糖结合物原液中游离糖含量测定方法的建立及其验证

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【摘要】：目的建立A群脑膜炎球菌多糖结合物原液中游离糖含量测定的方法,并进行验证。方法采用脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,DOC)法,分别取1 ml 10、50、100、150、200、250、294μg/ml载体蛋白破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT),与100μl 1%DOC溶液(pH 7.3)混匀,离心收集上清,检测蛋白含量,确定DOC沉淀载体蛋白范围;用不同离子强度梯度的缓冲液(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mol/L氯化钠)稀释游离多糖与载体蛋白混合物溶液,收集上清,检测多糖含量,确定游离多糖分离条件;以1%DOC溶液作为稀释剂绘制参考品磷含量测定标准曲线,确定DOC存在对磷含量测定结果的影响,建立DOC沉淀蛋白结合磷含量测定方法测定A群脑膜炎球菌多糖结合物中游离糖含量的方法,并对建立的方法进行精密度、准确性及重复性验证。结果 DOC沉淀载体蛋白浓度控制在250μg/ml以下;将0.8 mol/L氯化钠溶液作为A群脑膜炎球菌多糖结合物中游离糖含量测定所需最佳稀释液;以1%DOC溶液作为稀释剂绘制的磷含量标准曲线线性范围在0~4μg/ml时,r2为0.999 9。A群脑膜炎球菌多糖结合物原液及游离糖对照品与载体蛋白混合物沉淀中蛋白回收率在95%~110%之间;游离糖添加试验回收率均在95%以上;4批A群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物游离糖含量平均值均在规定范围内。结论建立的DOC沉淀蛋白结合磷含量测定方法可有效分离结合物与游离多糖,并准确测定结合物含量。
【作者单位】： 兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心;
【关键词】： A群脑膜炎球菌多糖结合物 游离糖 含量测定
【基金】：国家科技支撑计划课题(2008BAI66B01)
【分类号】：R392
【正文快照】： 脑膜炎奈瑟菌(简称脑膜炎球菌)能引起流行性脑脊髓膜炎(简称流脑),是一个严重的公共卫生问题。根据荚膜多糖抗原结构及抗原特性的不同,可将脑膜炎球菌分为13个血清群,其中由A、B、C、W135和Y群脑膜炎球菌引起的病例占全世界发病总数的90%以上[1]。脑膜炎球菌荚膜多糖既是毒力

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 张莉,杨展澜,熊尧,彭疼疼,翁诗甫,吴瑾光;H~+对水溶液中脱氧胆酸钠聚集体的影响[J];物理化学学报;2004年10期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 袁军;李新国;瞿明霞;;脱氧胆酸钠酸沉淀法定量测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗中游离多糖的含量[J];中国生物制品学杂志;2011年10期

2 王公孝;刘璐;王斌;秦敏;熊慧玲;;C群脑膜炎球菌多糖-rP64K结合物的制备及免疫原性[J];生物技术世界;2013年06期

3 朱丽杰;黄丹丹;李钦堂;许冠辰;陈晓;;胆酸盐与Gemini表面活性剂复合物构建的纳米纤维和囊泡(英文)[J];物理化学学报;2013年11期

4 尹丹丹;周觉非;刘威;邹莎莎;杨溢尧;马诚;崔长法;江山;张雪梅;葛永红;;5型肺炎链球菌荚膜多糖与破伤风类毒素的结合及其影响因素探讨[J];中国新药杂志;2013年16期

5 王平;林海涛;张燕斌;焦小玲;王雪薇;刘梅影;;高效阴离子色谱-脉冲安培检测法测定脑膜炎球菌结合疫苗中A群多糖含量[J];药物分析杂志;2014年01期

6 王静;易特;罗秦;刘亚君;;紫外光照射制备具有光学活性的银纳米粒子[J];无机化学学报;2014年08期

7 韩悦颖;邵忠琦;杨丽霞;常云松;郝杰清;朱涛;;肺炎链球菌血清型7F荚膜多糖结合物中游离多糖含量的测定[J];中国新药杂志;2014年21期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 朱涛;朱婉玉;宇学峰;毛慧华;邵忠琦;;一种检测脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(CRM197)结合物中游离多糖含量的方法[A];2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周论文集[C];2013年

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 王博;八种蜂花粉多糖的分析及抗肿瘤活性研究[D];东北师范大学;2013年

2 刘晓宇;黄药子中性多糖的结构分析及其抗肿瘤活性研究[D];东北师范大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 鲍碧清;胆汁酸（盐）的组装及其磁学性质研究[D];福建师范大学;2007年

2 李俊;光谱法研究普萘洛尔与ctDNA相互作用及手性识别[D];山西大学;2008年

3 朱秀高;乳真蛋白和尿素与铵态氮检测方法研究[D];扬州大学;2010年

4 刘亚君;Ag纳米粒子的制备及手性性能研究[D];江苏科技大学;2010年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 卞江，，翁诗甫，张煦，吴瑾光，徐光宪;肉豆蔻酸和棕榈酸酸盐体系的振动光谱研究[J];高等学校化学学报;1996年03期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李文春,戴晓畅,杨美峰,钱雯,施z

本文编号：566537