NogoB-shRNA表达质粒的构建及其在大鼠原代肝星状细胞收缩中的作用
本文关键词：NogoB-shRNA表达质粒的构建及其在大鼠原代肝星状细胞收缩中的作用
【摘要】：目的构建针对大鼠NogoB基因的shRNA表达质粒,并初步探究其在大鼠肝星状细胞(HSCs)收缩功能中的作用。方法设计并合成针对大鼠NogoB基因3个不同位点的shRNA,通过DNA重组技术,将shRNA插入pSuper质粒中,构建NogoB-shRNA重组质粒,转染至大鼠原代肝星状细胞(HSCs)中,并通过Realtime PCR技术检测基因的相对表达量,筛选出能沉默大鼠NogoB基因的重组质粒,再通过Western blot加以验证,同时观察NogoB基因被抑制后,HSCs中内皮素1(Endothelin-1,ET-1)受体A、受体B(ETA、ETB)表达水平的变化。结果构建的3对重组质粒中,NogoB-shRNA2对NogoB的基因的表达具有明显的抑制作用。NogoB基因被抑制后,大鼠HSCs中ETA的表达无明显变化,ETB的表达升高,ETA/ETB的水平降低。结论成功构建了有效、特异的抑制大鼠NogoB基因表达的shRNA表达质粒,并初步观察到NogoB在肝星状细胞的收缩中可能有一定作用。
【作者单位】： 四川大学华西医院消化内科;四川大学华西医院再生医学研究中心心血管疾病研究室;
【关键词】： 短发夹RNA NogoB 肝星状细胞
【基金】：四川省科技厅项目(No.2013FZ0085) 四川省成都市科技厅项目(No.13PPYB994SF-014)资助
【分类号】：R346
【正文快照】： NogoB蛋白是主要位于内质网上的一组跨膜功能蛋白,它广泛分布于神经系统、心血管、肺、肾脏、肝脏等各种组织中,与肿瘤抑制、凋亡、血管重塑、损伤修复等密切相关[1 3]。肝星状细胞(HSCs)活化后具有增殖、分泌细胞外基质及血管平滑肌样的收缩功能,是引起肝窦阻力增加,从而导致
【参考文献】
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