TMEM16A和TMEM16B在CCI模型鼠DRG神经元上的表达

发布时间：2017-07-31 10:01

  本文关键词：TMEM16A和TMEM16B在CCI模型鼠DRG神经元上的表达

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【摘要】：目的:比较正常大鼠、坐骨神经压榨性损伤(Chronic Constriction Injury,CCI)模型鼠及不同浓度尼氟灭酸(Niflumic Acid,NFA)干预后的CCI模型鼠的热缩足反射潜伏期(Thermal Withdrawal Latency,TWL)的改变,及各组大鼠DRG神经元上TMEM16A和TMEM16B的m RNA水平和蛋白表达的改变,旨在探讨钙激活氯通道(calcium-ctivated chloride channels,Ca CCs)在神经病理性痛(Neuropathic pain,NPP)中的调节作用。方法:制作CCI模型;运用热板实验分别在术前1 d,术后第1、3、5、7、9、12、14d检测正常大鼠、CCI模型鼠及10μM、50μM和300μM的NFA干预后的CCI模型鼠的TWL;运用免疫荧光实验技术检测TMEM16A和TMEM16B在正常大鼠DRG上的分布;运用RT-PCR技术和Western Blot技术分别检测各组大鼠的DRG神经元上,TMEM16A和TMEM16B的m RNA水平和蛋白表达。结果:(1)CCI模型鼠较正常大鼠TWL明显缩短(P0.01,n=6),给予10μM、50μM和300μM的NFA干预后与CCI组相比TWL均明显延长(P0.01,n=6),其中50μM的NFA干预组较10μM的NFA干预组的TWL也明显延长(P0.01,n=6),但300μM的NFA干预组和50μM的NFA干预组之间的TWL无统计学差异。(2)免疫荧光显示在正常大鼠DRG中,TMEM16A和TMEM16B主要表达在DRG神经元上。(3)运用RT-PCR技术发现CCI模型鼠较正常大鼠DRG神经元上的TMEM16A的m RNA水平明显上调(P0.01,n=6),CCI模型鼠给予NFA干预后DRG神经元上的TMEM16A的m RNA水平显著下调(P0.01,n=6),随着NFA干预浓度的增加,TMEM16A的m RNA水平呈浓度依赖性的下调(P0.01,n=6);CCI模型鼠DRG神经元上的TMEM16B的m RNA水平明显下调;给予NFA干预后TMEM16B的m RNA水平显著上调(P0.01,n=6),随着NFA干预浓度的增加,TMEM16B的m RNA水平呈浓度依赖性的上调(P0.01,n=6)。(4)运用Western Blot技术发现CCI模型鼠与正常大鼠相比,DRG神经元上的TMEM16A的表达明显上调(P0.01,n=6),CCI模型给予NFA干预后,DRG神经元上的TMEM16A的表达明显下调(P0.01,n=6),随着NFA干预浓度的增加,TMEM16A的表达呈浓度依赖性的下调(P0.01,n=6);CCI模型鼠DRG神经元上的TMEM16B的表达明显下调;给予NFA后,TMEM16B的表达显著上调(P0.01,n=6),随着NFA干预浓度的增加,TMEM16B的表达呈浓度依赖性的上调(P0.01,n=6)。结论:NFA干预后CCI模型鼠DRG神经元上的TMEM16A和TMEM16B在转录和翻译水平均发生改变,提示TMEM16A和TMEM16B可能共同参与了神经病理性痛的产生。
【关键词】：钙激活氯通道 TMEM16A TMEM16B NFA DRG
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R741;R-332
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 英文缩略语表8-9
• 前言9-12
• 材料和方法12-25
• 1 材料12-17
• 1.1 实验动物及分组12
• 1.2 主要实验仪器12-14
• 1.3 主要实验试剂、耗材14-15
• 1.4 主要实验液体配置15-17
• 2 方法17-25
• 2.1 CCI动物模型制作方法17
• 2.2 NFA干预CCI模型的制备17
• 2.3 热板实验及行为学观察17-18
• 2.4 DRG神经元制备基本方法18
• 2.5 免疫荧光染色18-19
• 2.6 蛋白提取的基本方法19-20
• 2.7 Western Blot实验基本步骤20-23
• 2.8 RT-PCR实验基本步骤23-24
• 2.9 统计学方法24-25
• 结果25-31
• 1 痛行为学检测25-26
• 1.1 模型大鼠足部状态及行为学观测25
• 1.2 热缩足反射潜伏期25-26
• 2 免疫荧光试验结果26-27
• 3 RT-PCR实验结果27-29
• 4 Western blot实验结果29-31
• 讨论31-34
• 结论和展望34-35
• 1 结论34
• 2 展望34-35
• 参考文献35-39
• 文献综述39-46
• 参考文献43-46
• 致谢46-47
• 作者简介47-48
• 附页48

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本文编号：598564