人RACK1蛋白在HEK-293T和BL21细胞中的表达及COS7细胞的定位

发布时间：2017-07-31 13:38

  本文关键词：人RACK1蛋白在HEK-293T和BL21细胞中的表达及COS7细胞的定位

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【摘要】：目的构建可以表达有活性的蛋白激酶C受体(RACK1)的重组质粒,检测其在细胞内的表达与定位情况。方法设计上下游引物,以RACK1全长cDNA序列为模板,PCR扩增出RACK1序列,分别构建到载体pcDNA3.1和pGEX-5X-3。转染pcDNA3.1-FLAG-RACK1到人胚胎肾细胞(HEK-293T)和非洲绿猴肾成纤维细胞(COS7细胞),转化pGEX-5X-3-RACK1到大肠杆菌BL21感受态细胞中表达,Western blot法和考马斯亮蓝染色法检测RACK1表达情况,免疫荧光法研究其细胞内定位。结果成功构建了pcDNA3.1-FLAG-RACK1和GEX-5X-3-RACK1重组质粒。Western blot证明了其在HEK-293T细胞中的表达,考马斯亮蓝染色显示其在BL21菌株也能大量表达,免疫荧光显示RACK1在COS7的细胞核与细胞质中均有分布。结论人RACK1在HEK-293T细胞和BL21菌株中均能有效表达,在COS7细胞的胞质、胞核均有分布,为进一步研究人RACK1基因的功能奠定了基础。
【作者单位】： 安徽医科大学生命科学院生物学教研室;
【关键词】： RACK 基因表达 细胞定位 BL
【基金】：国家自然科学基金青年基金(编号:81201368) 安徽省自然科学基金(编号:11040606M170、11040606M164) 安徽省教育厅自然科学重点科研项目(编号:KJ2010A187)
【分类号】：R3416
【正文快照】： 有活性的蛋白激酶C受体(repector for activatedC kinase,RACK1)是一种分子量为36 ku的G蛋白β亚单位的同源物,是WD-40蛋白家族中的一个成员。编码基因定位于5q35.3,是RACKS家族中第一个被识别的成员[1],并且RACK1蛋白从衣藻到人类都是保守的。后来因为其结构与哺乳动物G蛋白

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本文编号：599450