结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA、Mpa基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定

发布时间：2017-07-31 14:28

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【摘要】：目的构建结核杆菌泛素样蛋白-蛋白酶体系统中Pup、Dop、PafA和Mpa基因的重组大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV361/Pup、pMV361/Dop、pMV361/PafA和pMV361/Mpa,并对其进行鉴定。方法提取结核杆菌国际标准强毒株H37Rv基因组DNA,以此为模板PCR扩增Pup、Dop、PafA和Mpa基因编码序列并测序。扩增产物克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV361,并转化E.coli DH5α感受态细胞,利用PCR技术、双酶切技术及基因测序技术对构建的重组穿梭表达质粒进行鉴定。结果 PCR扩增的Pup、Dop、PafA和Mpa基因片段分别为213、1 683、1 377、和1 848bp,与预期长度一致;双酶切鉴定Pup、Dop、PafA和Mpa基因均成功插入穿梭表达质粒pMV361,测序显示插入穿梭表达质粒pMV361的Pup、Dop、PafA和Mpa基因序列与GenBank公布的序列一致。结论成功构建了重组大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV361/Pup、pMV361/Dop、pMV361/PafA和pMV361/Mpa,为进一步研究结核分枝杆菌泛素样蛋白-蛋白酶体系统奠定了基础。
【作者单位】： 石河子大学医学院病理生理学教研室 石河子大学"新疆地方与民族高发病"教育部重点实验室;石河子市人民医院老年病一科;
【关键词】： 结核分枝杆菌 泛素样蛋白-蛋白酶体系统 pMV 重组穿梭表达质粒
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81260261,81160192,81260241,81160001) 新疆生产建设兵团医药专项资金项目(No.2012BA022)
【分类号】：R378
【正文快照】： 结核病是一种由结核分枝杆菌(MycobacteriumTuberculosis,MTB)感染引起的呼吸道传染性疾病。据统计[1],全球每年约有150万人因患结核病而死亡,并且近几年结核病患病人数急剧攀升,每年约有900***万新增病例,故结核病又被称为“灾难性疾病”。MTB中的泛素样蛋白-蛋白酶体系统(pr

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本文编号：599629