不同阶段泡沫细胞模型的建立与鉴定

发布时间：2017-08-04 18:18

  本文关键词：不同阶段泡沫细胞模型的建立与鉴定

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【摘要】：目的建立不同阶段的泡沫细胞,并对其生物特性进行鉴定。方法体外培养人THP-1来源的巨噬细胞(THP-M),由ox-LDL诱导其转化为不同阶段泡沫细胞,ELISA方法检测不同阶段泡沫细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量;透射电镜和油红O染色光镜观察细胞内脂质,噻唑蓝染色法测定不同阶段泡沫细胞的活性变化规律。Western blot方法测定II型微管相关蛋白1轻链3(LC3II)蛋白表达水平。结果 24h开始,THP-M细胞质内出现大量的红染颗粒或脂质空泡,总胆固醇和胆固醇酯均较对照组增加,细胞胆固醇酯含量大于总胆固醇的50%,泡沫细胞已经形成。噻唑蓝染色结果显示,自48h开始少量泡沫细胞出现死亡现象(存活率93.21±3.66%),60h和72h细胞存活率率分别为72.15±2.23%和63.06±1.83%。电镜扫描结果发现,24h细胞内脂滴聚集,24h内细胞浆自噬小体逐渐增多。36h、48h细胞内脂滴大小和形态各异,可见吞噬脂滴后尚未消化完全的自噬溶酶体,部分细胞膜破裂;60h和72h,细胞内自噬小体数量明显减少,细胞大量崩解。Western blot检测结果表明自噬标志性蛋白LC3II表达水平变化规律与电镜观察自噬小体结果一致。结论利用oxLDL诱导THP-M24h、36h-48h、60h-72h后,细胞形态和细胞内脂含量分别符合早期、中期和晚期泡沫细胞的生物特征,成功建立了早、中、晚期泡沫细胞模型,其中细胞活力变化可能与II型凋亡(自噬性死亡)相关。为不同病程AS研究提供支持。
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院国家心血管病中心阜外心血管病医院心血管疾病国家重点实验室北京市心血管植入材料临床前评价重点实验室动物实验中心;
【关键词】： 氧化型低密度脂蛋白 THP-细胞 泡沫细胞 动脉粥样硬化
【基金】：国家自然科学基金项目(81200213)
【分类号】：R329
【正文快照】： 动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是贯穿心脑血管疾病的主线,是心肌梗死和脑卒中两大主要心脑血管疾病的最根本原因。泡沫细胞在AS发生与发展中扮演重要角色[1-3]。建立稳定可靠的泡沫细胞模型[4,5],对研究AS分子机制及筛选抗AS药物有重要的意义。但总结多篇利用泡沫细胞模型

【参考文献】

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本文编号：621010