新型人工miRNA表达框架的构建及其有效性验证

发布时间：2017-08-05 07:46

  本文关键词：新型人工miRNA表达框架的构建及其有效性验证

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【摘要】：目的构建针对EGFP基因的人工miRNA表达框架并验证其有效性。方法用融合PCR技术在体外构建针对EGFP基因的人工miRNA表达框架。经测序比对后,以该表达框架与报告基因质粒p EGFP-N2分别共转染人肝癌细胞系Hep G2、人宫颈癌细胞系He La和人肺腺癌细胞系A549,48 h后用倒置荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况并用流式细胞仪定量检测其抑制效率。结果构建的人工miRNA表达框架经测序比对正确;共转染该表达框架和报告基因质粒p EGFP-N2后,倒置荧光显微镜观察结果显示,3种细胞中发出荧光的细胞数量减少,荧光强度明显降低。流式细胞术检测结果显示,Hep G2细胞、He La细胞和A549细胞中共转染组和单独转染组的细胞荧光表达率差异均有统计学意义(t分别为20.80、30.35和20.34,P均0.01)。结论成功构建靶向EGFP的人工miRNA表达框架,且此表达框架能有效而特异地抑制EGFP蛋白在Hep G2细胞、He La细胞和肺癌A549细胞中的表达。
【作者单位】： 中南大学湘雅医学院医学检验系;
【关键词】： 人工miRNA表达框架 EGFP基因 Hep G细胞 He La细胞 A细胞
【基金】：中南大学本科生自由探索计划项目(2282014bks193)
【分类号】：R3416
【正文快照】： 人工miRNA(artificial microRNA,amiRNA)技术以内源miRNA前体(pre-miRNA)作为骨架,将pre-miRNA的正义链和反义链置换为设计好的序列后转入动植物中,利用miRNA的内源性作用机制来抑制特定的靶基因[1]。与小干扰RNA(siRNA)相比,amiRNA具有较高的生物安全性和较低的毒副作用[2-3]

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 王传新;;MicroRNA在肿瘤研究中的应用[J];临床检验杂志;2012年10期

2 汪俊军;;microRNAs与心血管疾病[J];临床检验杂志;2013年05期

3 赵海峰;李丹丹;李英;胡伟;王学军;王升启;;人工microRNA抗乙型肝炎病毒效果初探[J];生物技术通讯;2011年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 刘婷;王静;汪俊军;;脂质相关miRNA研究进展[J];临床检验杂志;2014年07期

2 陈光辉;闫慧;孙长义;赵静;;非小细胞肺癌患者癌组织和血浆中microRNA-21的表达及意义[J];临床检验杂志;2014年09期

3 李英;谢佩雯;黄海;张秀娟;胡伟;王学军;王升启;;基于miRNA-155结构的人工miRNA表达载体的构建与评价[J];生物技术通讯;2012年06期

4 李英;胡伟;崔修亮;王学军;王升启;;人工microRNA技术研究进展[J];生物技术通讯;2012年06期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李力群;高建华;潘盛盛;倪彬婷;;人高活性血管基质层细胞快速分离及荧光标记的实验研究[J];中国修复重建外科杂志;2012年07期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 曾玉杰;冯义柏;于世龙;王勇;颜红兵;李宪伦;柯元南;;缺血再灌注对心肌细胞间隙连接通讯影响的研究[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年

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本文编号：623781