新生大鼠肺成纤维细胞的原代培养改良法及细胞鉴定

发布时间：2017-08-07 09:20

  本文关键词：新生大鼠肺成纤维细胞的原代培养改良法及细胞鉴定

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【摘要】：探讨新生大鼠肺成纤维细胞原代培养的改良方法及细胞鉴定。用胰酶消化组织块结合的方法提取新生大鼠肺成纤维细胞,并纯化细胞,对肺成纤维细胞进行形态学观察,用HE染色及免疫组化染色法对细胞进行鉴定,并用MTT法测定细胞生长曲线。倒置相差显微镜下观察选用改良法获得的细胞,3 d后可见组织块周边有少许细胞,5 d后组织块周围有大量细胞爬出,生长迅速,10 d接近融合。经改良后的方法纯化细胞,细胞活性状态较好的为3~5代,5代以后的细胞增殖能力下降。对第3代肺成纤维细胞进行HE染色,镜下可见形态典型的成纤维细胞,免疫组化结果显示波形蛋白(Vi-mentin)阳性表达,细胞角蛋白(cytokeratin)阴性表达。MTT法检测第3代细胞于3~5 d处于对数生长期。胰酶消化组织块结合法是一种可靠快速的肺成纤维细胞分离纯化的培养方法,使用这种方法可得到具有典型形态特征且活性较好的肺成纤维细胞,初学者容易掌握。
【作者单位】： 武汉大学中南医院呼吸内科;
【关键词】： 肺成纤维细胞 原代培养 改良培养法 细胞鉴定
【基金】：湖北省自然科学基金(2011CDB527)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 肺成纤维细胞(lung fibroblast,LF)是体内外研究肺纤维化及其他肺部疾病的主要细胞[1],原代新生大鼠的肺成纤维细胞由于直接来源于机体组织,生物性状尚未发生较大的变化,能较好反应体内的生长特性,因此广泛用于药理、毒理、药效试验。本文主要探讨新生大鼠肺成纤维细胞原代培

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本文编号：633898