难转染悬浮细胞OCI-LY8慢病毒过表达稳定细胞株的构建

发布时间：2017-08-08 23:18

  本文关键词：难转染悬浮细胞OCI-LY8慢病毒过表达稳定细胞株的构建

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【摘要】：目的探讨难转染悬浮细胞慢病毒过表达稳定细胞株的构建方法。方法选用人弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞株OCI-LY8为研究对象,分别用Fbw7基因的慢病毒原液、慢病毒浓缩液、慢病毒浓缩液加入终浓度为5μg/mL的1,5-二甲基-1,5-二氮十一亚甲基聚甲溴化物(polybrene)、慢病毒浓缩液加入终浓度为10μg/mL的polybrene 4种方式进行感染。因慢病毒载体含有绿色荧光蛋白报告基因,故通过倒置荧光显微镜观察细胞内荧光的数量及强度来评判上述4种方式的感染效率,并用Real-time PCR和Western blot进行验证。结果慢病毒原液的感染效率极低,仅在少许细胞中看到极微弱的荧光;慢病毒浓缩液的感染效率尚可,约有60%的细胞可以观察到微弱的荧光;慢病毒浓缩液中加入5μg/mL polybrene的感染效率较高,约90%的细胞可以观察到较强的荧光;慢病毒浓缩液中加入10μg/mL polybrene的感染效率极高,几乎全部细胞均可以观察到很强的荧光。结论慢病毒浓缩液中加入合适浓度的polybrene是感染DLBCL细胞株OCI-LY8较为有效的方法。慢病毒的感染效率与细胞的状态、感染复数、polybrene的浓度密切相关。
【作者单位】： 汕头大学医学院;广东省人民医院(广东省医学科学院)病理医学部病理科;
【关键词】： Fbw 慢病毒载体 悬浮细胞 人淋巴瘤细胞 感染 荧光效率
【基金】：国家自然科学基金面上项目(编号:81172244)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： Fbw7(F-box and WD40 repeat domain-contai-ning 7)又称Fbxw7、Sel-10、AGO和hCDC4,是定位于4q31的抑癌基因,其编码的蛋白Fbw7可介导许多重要蛋白质的泛素化。目前,已在很多人体肿瘤中检测到Fbw7的功能缺失及其底物累积[1-2],然而该基因是否参与弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的

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本文编号：642501