TMEM16A钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的表达及其电生理特性研究

发布时间：2017-08-11 18:03

  本文关键词：TMEM16A钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的表达及其电生理特性研究

  更多相关文章： 跨膜蛋白A 钙激活氯离子通道 膜片钳术 Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞

【摘要】：目的:探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞的表达及其电生理特性。方法:构建pUB6/V5-TMEM16A真核表达载体。脂质体方法转染TMEM16A至FRT细胞,同时优化脂质体和载体的量和比例,获得最佳转染效率和表达效果,杀稻瘟菌素(blasticidin)进行抗生素筛选,获取稳定表达TMEM16A的FRT细胞株。RT-PCR和免疫荧光检测TMEM16A于FRT细胞的表达情况;倒置荧光显微镜下观察TMEM16A在FRT细胞中的表达和定位;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFPH148Q/I152L检测TMEM16A钙激活氯离子通道的功能。结果:BamHⅠ和XbaⅠ双酶切的琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明目的基因TMEM16A成功克隆到真核表达载体pUB6/V5中;RT-PCR和免疫荧光实验结果表明经杀稻瘟菌素筛选后的FRT细胞在mRNA和蛋白水平表达TMEM16A,倒置显微镜下观察结果表明TMEM16A在FRT细胞膜上有表达;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFP-H148Q/I152L证实稳定表达于FRT细胞的TMEM16A具有经典的钙激活氯离子通道特性。结论:FRT细胞可高效表达TMEM16A。TMEM16A是钙激活氯离子通道的分子基础。
【作者单位】： 吉林医药学院生物化学检验教研室;吉林医药学院营养教研室;吉林医药学院病原教研室;
【关键词】： 跨膜蛋白A 钙激活氯离子通道 膜片钳术 Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81202031) 吉林省教育厅基金资助课题(No.2013-351;No.2009-510) 吉林省大学生创新创业训练计划856 吉林医药学院大学生科研基金资助课题(吉医学科字[2012]第12号)
【分类号】：R363
【正文快照】： 钙激活氯离子通道(calcium-activated chloridechannels,CaCCs)是一类在哺乳动物细胞中广泛表达的离子通道蛋白,因其通过胞浆中游离钙离子而激活,并跨膜转运体内含量最丰富的阴离子氯离子而命名为钙激活氯离子通道[1]。钙激活氯离子通道广泛地存在于各种兴奋性和非兴奋性细胞

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 黎关龙;黄林静;何金波;马迎春;陈海娥;应磊;汪洋;王万铁;;容量激活性氯离子通道在低氧高二氧化碳处理的大鼠PASMCs的表达及其与MAPK通路的关系[J];中国病理生理杂志;2014年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 马迎春;郑梦晓;黄林静;王园园;应磊;王万铁;;Kv1.5对大鼠低氧高二氧化碳性PASMCs增殖、凋亡的影响及与MAPK通路的关系[J];中国病理生理杂志;2014年09期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 李悦梅,冯大明,万载阳,王双,沈丹彤,赵桂玲,杨永宗;组织块法培养大鼠肠系膜小动脉的平滑肌细胞[J];南华大学学报(医学版);2003年03期

2 李丹;张艳华;陈少杰;虞旭光;林向东;唐兰兰;王淑君;王园园;黎关龙;王万铁;;大鼠肾缺血-再灌注后JNK mRNA及蛋白表达的变化及银杏达莫注射液的干预作用[J];中国中西医结合肾病杂志;2011年04期

3 朱阿楠;王万铁;林丽娜;王方岩;吴成云;金立达;王少军;王青;;MAPK通路抑制剂对低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的影响[J];中国病理生理杂志;2008年08期

4 朱阿楠;王园园;王淑君;金可可;汪洋;王万铁;;ERK通路和三七总皂苷干预在低氧高二氧化碳性肺动脉高压中的作用[J];中国病理生理杂志;2011年09期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 金龙;沈云英;;腺垂体的组织化学与免疫组化观察[J];福建医科大学学报;1987年01期

2 陈田田;;背向散射积分技术在甲状腺功能亢进检测中的应用[J];医学影像学杂志;2007年06期

3 吴淑兰;王仲涛;王树娥;朱惠民;于志恒;刘贵生;;喂养高碘饲料后小鼠甲状腺超微结构的变化[J];河北医科大学学报;1990年01期

4 吴淑兰;王仲涛;王树娥;张玉英;刘贵生;;小白鼠甲状腺超微结构研究[J];河北医科大学学报;1989年03期

5 方一心;;家兔实验性骨折愈合过程中甲状腺组织学及组织化学的变化[J];解剖学报;1966年03期

6 杨红华;裴学菊;;对细胞学诊断本氏甲状腺肿的探讨[J];中国社区医师(综合版);2007年03期

7 任广睦;荆彩亮;刘季;王亚方;王英元;;甲状腺滤泡上皮细胞DNA含量与死亡时间的相关性[J];法医学杂志;2007年02期

8 李玲凤,孙克继,刘英琴,朱琳;大鼠肝部分切除后甲状腺组织学和免疫组织化学变化[J];首都医科大学学报;1986年04期

9 苏敏,牛恕淼;自身免疫性甲状腺炎和甲亢原位免疫电镜研究[J];西安交通大学学报(医学版);1991年03期

10 赵R，

本文编号：657479