腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度荧光定量RT-PCR检测方法的建立及验证

发布时间：2017-08-11 22:36

  本文关键词：腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度荧光定量RT-PCR检测方法的建立及验证

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【摘要】：目的建立腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度荧光定量RT-PCR检测方法,并进行验证。方法针对腮腺炎减毒活疫苗株S79血凝素(hemagglutinin,H)基因保守区域设计特异性引物和Taq Man荧光探针;以05008批腮腺炎减毒活疫苗S79株成品作为参考品,将参考品或供试品稀释后,接种于长成单层的Vero细胞中,采用低渗合并冻融法将细胞破碎,吸取上清,进行荧光定量RT-PCR。优化病毒感染时间,并对该方法的特异性、精密性及准确性进行验证。结果病毒感染的最佳时间为18 h;建立的荧光定量RT-PCR法只对腮腺炎减毒活疫苗具有特异性扩增,对灭活的腮腺炎减毒活疫苗、水痘病毒、狂犬病病毒、麻疹病毒、风疹病毒和Vero细胞均无扩增曲线出现;该方法检测4个浓度(1、1:5、1:52、1:53)样品6组数据的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均5%,不同操作人员于不同日期检测4个浓度(1、1:5、1:52、1:53)样品的标准曲线回归方程R2均大于0.97,RSD均5%;该方法与细胞病变法测得的11批腮腺炎减毒活疫苗成品的病毒滴度值之差均≤0.2 Lg CCID50/ml,两组数据差异无统计学意义(P0.05)。结论建立的荧光定量PCR法检测腮腺炎减毒活疫苗感染性滴度特异性较强,精密性和准确性良好,且快速方便,可应用于企业生产过程中的内部质控。
【作者单位】： 科兴(大连)疫苗技术有限公司;
【关键词】： 腮腺炎减毒活疫苗S株 荧光定量逆转录-聚合酶链反应 病毒感染性滴度
【分类号】：R373.16;R392-33
【正文快照】： 流行性腮腺炎是由腮腺炎病毒(mumps virus,Mu V)引起的以腮腺肿大为特征的急性呼吸道传染病,发病以儿童、青少年为主,多见于冬春季节。2013年,我国流行性腮腺炎的发病率为23/10万[1],处于丙类传染病中发病数的前三位。自20世纪60年代以来,腮腺炎减毒活疫苗在世界范围内广泛使

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本文编号：658564