空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2017-08-12 03:30

  本文关键词：空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素单克隆抗体的制备与鉴定

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【摘要】：【目的】原核表达空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素B蛋白(CdtB),制备其单克隆抗体(mAb),并研究mAb抗毒性作用。【方法】扩增空肠弯曲菌cdtB基因并将其构建到pET-30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,以原核表达的GST-CdtB蛋白为免疫原,应用杂交瘤技术进行细胞融合;采用间接ELISA方法测定细胞上清和mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性,并以CaCo-2和HD-11细胞为模型,鉴定mAb抗毒性能力。【结果】成功构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-cdtB和pGEX-6p-1-cdtB,并融合表达rHis-CdtB和rGST-CdtB蛋白。获得5株稳定分泌CdtB抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1F3,1F5,2E4,2E11,2F2。抗体Ig类和亚类检测显示2E11 Ig亚类为IgG2b,其他4株均为IgG1。抗体效价高达1:(1×108)。Dot-ELISA试验表明5株mAb均能与空肠弯曲菌标准株发生特异性反应,与非空肠弯曲菌呈阴性反应;Western blot法分析表明5株mAb均能与纯化蛋白rGST-CdtB有良好的反应性。基于CaCo-2细胞的黏附和侵袭实验表明mAb能显著降低细菌的黏附和侵袭能力(P0.01)。【结论】成功制备了针对空肠弯曲菌CdtB蛋白的mAb。为进一步研究空肠弯曲菌致病机制,以及为研制治疗性类药物奠定了基础。
【作者单位】： 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
【关键词】： CdtB蛋白 空肠弯曲菌 单克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金(31372449) 国家“863计划”(2012AA101601) 国家科技支撑计划(2014BAD13B02)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,Cj)是一类革兰氏阴性、微需氧、可移动的弯曲短杆菌,是引起人胃肠道感染最常见的人兽共患病原菌。某种血清型的空肠弯曲菌可引起周围神经自身免疫性格林-巴利综合症(Guillain-Barre syndrome,GBS)[1]。空肠弯曲菌由于培养条件苛刻、抗原结构

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本文编号：659582