含EB病毒核抗原1重组腺病毒的构建及其在小鼠中免疫效果研究

发布时间：2017-08-15 11:06

  本文关键词：含EB病毒核抗原1重组腺病毒的构建及其在小鼠中免疫效果研究

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【摘要】：构建含EB病毒核抗原1(ebna1)重组腺病毒疫苗防治鼻咽癌,并为鼻咽癌疫苗的研究提供药效学资料。PCR法扩增B95-8细胞株中ebna1的C-端部分片段,EcoRI和BglⅡ酶切后插入pDC316穿梭质粒,ebna1片段测序比对正确后,与腺病毒骨架质粒pBHG共转染293细胞。收集病变后细胞,通过流式细胞仪和Western blot检测EBNA1在293细胞中的表达。电镜下观察所获得的病毒颗粒大小,TCID50法确定重组腺病毒滴度。以2×108 VP/只的rAd-ebna1免疫BALB/c小鼠。在免疫结束后的第1、2、4和8周检测小鼠体内EBNA1特异性细胞免疫应答的水平变化。结果显示,经PCR扩增获得约900bp ebna1目的片段,测序结果与标准株序列一致,质粒共转染293细胞后,细胞出现病变,获得含EB病毒核抗原1重组腺病毒(rAd-ebna1),流式细胞仪和Western blot检测结果证实,ebna1在细胞中正确转录表达,收获病毒二代滴度可达108 TCID50/mL。rAd-ebna1免疫小鼠后,能够激活EBNA1的CD4+T细胞特异性细胞免疫应答。本实验成功构建了含ebna1片段的重组腺病毒,并具激活CD4+T细胞免疫应答活性。
【作者单位】： 北京工业大学生命科学与生物工程学院;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室;
【关键词】： EBNA(EB病毒核抗原) 重组腺病毒 疫苗
【基金】：国家“973”项目:病毒潜伏感染的分子机制(2011CB504800) 国家“863”项目:病毒性鼻咽癌疫苗关键技术研究及产品开发(2012AA02A404) 环境与病毒肿瘤学北京市重点实验室开放课题项目EBNA1特异性细胞免疫与鼻咽癌发生发展关系的研究(EV02012021)
【分类号】：R373;R392
【正文快照】： 鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国南方及东南亚一些地区常见的恶性肿瘤之一。20世纪60~70年代系列研究和实践证实NPC的发生发展与EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)感染密切相关,在鼻咽癌患者的肿瘤组织中有EB病毒EBNA1、LMP1、LMP2的表达[1]。EBV是第一个被认为与人

【参考文献】

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本文编号：677800