复方贞术调脂方对昼夜节律失调所致糖脂代谢紊乱小鼠模型的干预作用及机制研究

发布时间：2017-08-16 00:11

  本文关键词：复方贞术调脂方对昼夜节律失调所致糖脂代谢紊乱小鼠模型的干预作用及机制研究

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【摘要】：目的:本研究通过构建昼夜节律失调所致糖脂代谢紊乱的小鼠模型,应用“调肝启枢化浊”理论代表方——复方贞术调脂方(FTZ)对该模型进行干预,并探讨其作用机制。方法:1、糖脂代谢紊乱小鼠模型的构建。取6周龄左右C57BL/6J雄性小鼠104只,分为4组,即:空白组(CON,8只,白天光照,晚上黑暗)、24h小时光照组(24hL,36只,白天光照,晚上光照)、24h小时黑暗组(24hD,36只,白天黑暗,晚上黑暗)、饮食和光照紊乱组(RFL,36只,白天黑暗,晚上光照)。CON、24hL、24hD组自由进食;RFL组白天进食,晚上禁食;持续时间12周。通过动态监测小鼠白天/晚上进食量、体重、糖代谢指标(FBG、FINS、OGTT、ITT)、脂代谢指标(TC、TG、HDL-C、LDL-C)判断模型是否建立成功。2、FTZ对糖脂代谢紊乱小鼠模型的干预作用及机制研究。取方法1中24hL、24hD、RFL组小鼠,每组又分为4小组,每小组8只,即:对照组、罗格列酮组、FTZ高剂量组、FTZ低剂量组。一共为13组,给药8周。动态监测小鼠白天/晚上进食量、体重;第9周测定小鼠糖、脂代谢指标;第10周,根据Zeitgeber Time(开始光照时间记为ZT0),各组别在ZTO(8:00am)、ZT6(2:00pm)、ZT12(8:00pm)、ZT18(2:00am)4个时间点(各2只)处死小鼠。取小鼠肝脏、附睾脂肪、肾周脂肪,计算小鼠肝脏指数、体脂比;测肝脏TC、TG含量;对小鼠肝脏进行组织固定,制作肝脏病理组织切片;提取肝脏总RNA,采用RT-PCR检测肝脏时钟基因mClock、mBmal1、mCry1以及糖脂代谢相关基因PPARγ的实时动态的表达量。结果:1、经过12周的造模,24hL、24hD、RFL组与CON组比较,体重明显增加(p0.05);小鼠饮食规律发生变化,白天/晚上进食比例改变;24hL、24hD、RFL组TG、LDL-C、FBG、FINS均高于CON组(p0.05),24hL、24hD组TC水平较CON组高(p0.05),但RFL组无统计学意义(p0.05),RFL组HDL-C水平与CON组相比明显降低(p0.05),而24hL、24hD组却无统计学意义(p0.05);24hL、24hD、RFL组HOMA-IR和ISI与CON组相比明显增高,具有统计学意义(p0.05);OGTT实验中,相同时间点的血糖浓度各组间无差异(p0.05),但AUC显示24hL、24hD组与CON组相比明显升高(p0.05),RFL组无统计学意义(p0.05),24hL、24hD、RFL组的ITT实验AUC和CON组相比,明显升高(p0.05)。2、经过8周的药物治疗,FTZ略微降低小鼠的进食量,小鼠体重有下降的趋势(无显著差异);FTZ降低LCON、DCON、RCON组小鼠血清TC、LDL-C、FBG、FINS水平(p0.05);FTZ治疗LCON、DCON、RCON组小鼠后,改善HOMA-IR、ISI、AUC(ITT)(p0.05),LCON、DCON、RCON组小鼠肝脏中TC、TG水平下降明显,减轻体内脂肪、体脂比、肝脏指数,且具有显著性差异(p0.05),不同程度的缓解LCON、DCON、RCON组小鼠肝脏组织病变。但FTZ降低LCON、DCON、RCON组小鼠血清TG、AUC(OGTT)以及升高LCON、DCON、RCON组小鼠血清HDLC效果不明显(p0.05)。LCON、DCON、RCON组与CON组相比,肝脏组织中mBmal1、mCry1和PPARγ基因总表达量升高或基因表达节律改变;FTZ能够改善Cry1和PPARγ基因表达总量或者恢复其表达节律,FTZ对Bmal1基因表达节律性作用不明显,但对振幅有一定的影响。结论:1、经过12周改变小鼠光照或进食时间,成功构建昼夜节律失调所致糖脂代谢紊乱的小鼠模型。2、模型小鼠经过FTZ治疗8周后,FTZ明显改善小鼠糖脂代谢,其作用机制可能是恢复小鼠肝脏Cry1及PPARγ基因表达的节律性。
【关键词】：糖脂代谢紊乱 昼夜节律失调 复方贞术调脂方 生物钟基因 PPARγ
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 第一章 绪言13-22
• 1 昼夜节律基因的研究进展13-14
• 2 昼夜节律与糖脂代谢14-17
• 3 昼夜节律紊乱模型的研究进展17-19
• 4 昼夜节律紊乱与治疗药物19-20
• 5 FTZ前期研究进展20-21
• 6 本课题的提出21-22
• 第二章 昼夜节律失调所致糖脂代谢紊乱小鼠模型的建立22-37
• 2.1 材料22-24
• 2.1.1 实验动物22
• 2.1.2 实验主要仪器22-23
• 2.1.3 实验主要试剂23
• 2.1.4 试剂的配制23-24
• 2.2 方法24-29
• 2.2.1 动物分组24
• 2.2.2 指标检测24-27
• 2.2.3 测定原理27-28
• 2.2.4 统计分析28-29
• 2.3 结果29-35
• 2.3.1 各建模方法对小鼠每日饮食摄入量、白天/晚上摄入比例、体重的影响29-31
• 2.3.2 各建模方法对小鼠血脂代谢的影响31-33
• 2.3.3 各建模方法对小鼠血糖代谢的影响33-35
• 2.4 讨论35-36
• 2.5 结论36-37
• 第三章 FTZ对昼夜节律失调所致糖脂代谢紊乱小鼠模型的影响37-61
• 3.1 材料37-39
• 3.1.1 实验动物37
• 3.1.2 实验主要试剂37-38
• 3.1.3 实验主要仪器38
• 3.1.4 试剂的配制38-39
• 3.2 方法39-44
• 3.2.1 动物分组39
• 3.2.2 试验药物39
• 3.2.3 指标检测39-41
• 3.2.4 测定原理41
• 3.2.5 小鼠的处理41-43
• 3.2.6 统计分析43-44
• 3.3 结果44-60
• 3.3.1 FTZ对小鼠每日饮食摄入量、体重增加量、白天/晚上摄入比例的影响44-46
• 3.3.2 FTZ对小鼠血脂代谢的影响46-49
• 3.3.3 FTZ对小鼠血糖代谢的影响49-54
• 3.3.4 FTZ对小鼠体脂重量、体脂比、脏肝指数的影响54-56
• 3.3.5 FTZ对小鼠肝脏TC、TG水平的影响56-58
• 3.3.6 FTZ对小鼠肝脏整体及肝脏组织石蜡切片的影响58-60
• 3.4 讨论60
• 3.5 结论60-61
• 第四章 FTZ对昼夜节律失调小鼠肝脏的生物钟基因及脂质因子的影响61-70
• 4.1 材料61-62
• 4.1.1 实验材料61-62
• 4.1.2 主要试剂62
• 4.2 方法62-65
• 4.2.1 引物的设计和分装62-63
• 4.2.2 小鼠肝脏总RNA的提取63-64
• 4.2.3 逆转录反应64-65
• 4.2.4 实时荧光定量 PCR 反应65
• 4.2.5 统计分析65
• 4.3 结果65-69
• 4.4 讨论69
• 4.5 结论69-70
• 第五章 总结与展望70-71
• 参考文献71-76
• 攻读硕士期间发表的论文76-77
• 中英文缩略表77-78
• 致谢78

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