氧氟沙星噬菌体库的构建、筛选及抗体结构模拟

发布时间：2017-08-16 19:02

  本文关键词：氧氟沙星噬菌体库的构建、筛选及抗体结构模拟

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【摘要】：应用噬菌体展示和重组抗体技术制备抗氧氟沙星单链抗体(scFv)库,筛选获得氧氟沙星特异性噬菌体scFv以及同源模拟其三维结构。将从氧氟沙星杂交瘤细胞提取的总RNA,用RT-PCR反转录合成cDNA,以针对鼠源重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因的兼并引物,扩增获得VH和VL可变区基因,通过SOE-PCR法将VH基因和VL基因通过柔性多肽Linker(Gly4Ser)3拼接成全长scFv基因片段,将双酶切后的scFv基因片段插入T7噬菌体,经体外包装后转化宿主菌BLT5403,成功构建库容量为3×105pfu/mL的抗体库,经4轮吸附-洗脱-扩增的富集,采用直接竞争ELISA筛选到4个特异性噬菌体scFv,运用Expasy软件模拟特异性scFv的三维结构。为进一步大量表达氧氟沙星单链抗体奠定了基础。
【作者单位】： 河北北方学院;天津科技大学教育部食品营养与安全重点实验室;
【关键词】： 氧氟沙星 单链抗体 噬菌体展示 酶联免疫分析
【基金】：国家自然科学基金(No.20905058) 张家口市科技攻关项目(No.1311018C-3)资助~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 1引言氧氟沙星(Ofloxacin)为第三代喹诺酮类抗菌药,抗菌谱广,对革兰氏阳性菌及阴性菌均有强大的抗菌作用,对厌氧菌和肺炎支原体也有良好作用,广泛应用于畜牧业生产中。喹诺酮类药物对人体有一定副作用,包括对胃肠道不良反应、中枢神经系统不良反应、心脏的毒性作用[1],在牲畜

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 潘科;王弘;张宏斌;王捷;雷红涛;杨金易;孙远明;;抗克伦特罗噬菌体单链抗体库的构建、筛选及鉴定[J];华南理工大学学报(自然科学版);2005年11期

2 苗向阳,丁淑燕,朱玉良,郝慧芳,邵建军;噬菌体抗体库的构建及抗猪脂肪细胞膜单抗的筛选[J];中国农业科学;2005年06期

3 董进和,董峰,赵宪荣;喹诺酮类药物的不良反应[J];中国药物滥用防治杂志;2002年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 郑志明;金社胜;肖希龙;候晓林;;抗诺氟沙星噬菌体单链抗体库的构建与筛选[J];动物医学进展;2010年S1期

2 王睿;呼吸道感染常用抗菌药物的不良反应与合理用药[J];国外医学(呼吸系统分册);2003年06期

3 何扩;张秀媛;杜欣军;王俊平;杨青;;氧氟沙星单链抗体库的构建、筛选及蛋白结构模拟[J];现代食品科技;2014年03期

4 谢静;陶春平;邓立新;;氟喹诺酮类药物的常见不良反应及临床使用对策[J];海南医学;2009年10期

5 谢静;陶春平;邓立新;;95例氟喹诺酮类药物不良反应分析和合理应用[J];海南医学;2009年11期

6 李铁军;李德全;;抗速灭威噬菌体单链抗体库的构建、筛选及鉴定[J];湖北农业科学;2011年09期

7 何秀权,刘红杰,金文成;喹诺酮类抗菌药的不良反应及用药注意事项[J];哈尔滨医药;2004年03期

8 何光志;田维毅;王平;王文佳;奚锦;俞琦;黄高;王乾宇;;抗弓形虫噬菌体单链抗体库的构建及筛选[J];湖北大学学报(自然科学版);2011年03期

9 周艳红;祭芳;丁衬衬;史建荣;;抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇噬菌体单链抗体库的构建与鉴定[J];江苏农业学报;2010年05期

10 廖盆娇;静脉输液滴速对环丙沙星所致静脉炎的影响[J];南方护理学报;2004年08期

中国重要会议论文全文数据库 前2条

1 刘素娜;王玉军;;氟喹诺酮抗菌药的安全性及不良反应研究[A];第八届沈阳科学学术年会论文集[C];2011年

2 郑志明;金社胜;肖希龙;候晓林;;抗诺氟沙星噬菌体单链抗体库的构建与筛选[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 张志敏;苦马豆素对小鼠免疫功能的影响及其作用机制研究[D];西北农林科技大学;2008年

2 潮礼君;一种艾滋病病毒潜在抑制剂的功能研究[D];清华大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 赵俊;苦马豆素单链抗体基因的初步研究[D];西北农林科技大学;2007年

2 闻利平;环丙沙星7-位侧链的结构改造及抗菌活性研究[D];辽宁师范大学;2007年

3 刘蓉蓉;菌核净的免疫检测技术研究[D];南京农业大学;2007年

4 张颖;生长抑素基因工程天然及免疫鼠源单链抗体库构建研究[D];华中农业大学;2008年

5 刘昕煜;拟除虫菊酯类噬菌体抗体库的构建和筛选[D];天津科技大学;2011年

6 杨青;氧氟沙星噬菌体抗体库构建及筛选[D];天津科技大学;2012年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 苗向阳;基因工程抗体的研究进展[J];中国畜牧兽医;2003年04期

2 刘明亮;喹诺酮类抗菌药的概况与展望[J];国外医药(抗生素分册);2001年01期

3 仲兆金;喹诺酮类药物的毒性[J];国外医药(抗生素分册);2001年01期

4 仲兆金;喹诺酮类药物在老年人中的使用[J];国外医药(抗生素分册);2001年03期

5 仲兆金;喹诺酮类药物在儿科中的应用[J];国外医药(抗生素分册);2001年04期

6 杨俊涛,李正强,王清明,陈吉中,范国才,陈惠鹏;抗整合素β_3胞外区噬菌体抗体库的构建及筛选[J];生物技术通讯;2004年06期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈宇萍;张国民;乔媛媛;王刚;刘玉峰;化冰;王琰;;大容量人源噬菌体抗体库的构建[J];中国免疫学杂志;2006年05期

2 尹惠琼;单链抗体的研究进展[J];动物医学进展;2003年02期

3 姜宇飞,陈慰峰,Willemvan Ewijk;识别胸腺髓质上皮细胞和胸腺树突状细胞的单链抗体的筛选[J];中华微生物学和免疫学杂志;2000年04期

4 刘世明;李民友;钟峗;吴楚财;;抗人B型钠尿肽噬菌体抗体库的构建及噬菌体抗体的筛选[J];广东医学;2006年12期

5 何光志;田维毅;高英;王平;王文佳;奚锦;俞琦;王乾宇;黄高;;抗蛔虫人源单链抗体库的构建及鉴定[J];湖南师范大学自然科学学报;2011年03期

6 王桂云,朱筱娟,王丽;噬菌体展示外源多肽的免疫原性研究[J];东北师大学报(自然科学版);2001年03期

7 王字玲,邓健蓓,韩骅,陈萍,药立波,苏成芝;抗人黑色素瘤单链抗体基因的克隆和分泌型表达[J];中国生物化学与分子生物学报;1999年01期

8 廖楚航,王大章,杨西川,李扬,房思炼;抗人VEGF单链抗体基因的克隆及突变校正[J];实用医院临床杂志;2004年01期

9 季万胜,任军,周绍娟,费晋秀,陈峥,乔泰东,樊代明;癌胚抗原单链抗体-链亲和素融和蛋白的功能鉴定[J];第四军医大学学报;1999年04期

10 王长军,唐家琪,李先富,潘秀珍,操敏;噬菌体表面呈现抗人红细胞血型A抗原单链抗体的研究[J];中国免疫学杂志;2000年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 汪世华;张新艳;王天文;王宗华;;细菌HrpA蛋白的单链抗体的制备[A];2005全国第二届核酸疫苗研讨会论文集[C];2005年

2 王长军;唐家琪;李先富;潘秀珍;操敏;;抗人红细胞血型抗原噬菌体单链抗体的研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展（下册）[C];1999年

3 郑志明;金社胜;肖希龙;候晓林;;抗诺氟沙星噬菌体单链抗体库的构建与筛选[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年

4 王欲晓;乔媛媛;周丽君;;人源性抗蓖麻单链抗体的分离纯化和活性鉴定[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

5 汤永民;宁铂涛;曹江;沈红强;钱柏芹;张海忠;张怡;郭莉;;抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单链抗体真核表达载体的构建、表达及鉴定[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年

6 刘梦元;黄华j;尹长城;王祥斌;;抗TNF-α单链抗体的构建、表达及一步柱上纯化和复性[A];中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2005年

7 郭崇志;王玉霞;孙曼霁;;抗电鳐乙酰胆碱酯酶单克隆抗体3F3的单链抗体高级结构的计算机模拟及其抑制酶活性机理探讨[A];第七届全国生化药理学术讨论会论文摘要集[C];2000年

8 严丹丹;杨福辉;方瑾;宋今丹;;抗人大肠癌基因工程双价单链抗体的构建及表达[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年

9 李芳芳;;重症肌无力单链抗体融合蛋白的酵母菌表达及特异性鉴定[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

10 肖代雯;沈昕;邢薇;黄宇;雷萍;朱慧芬;刁智娟;刘红云;沈关心;;抗TfR双价抗体的构建、表达及其鉴定[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 记者 李天舒;抗狂犬病毒人源抗体制备成功[N];健康报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 安广宇;抗血小板膜糖蛋白基因工程抗体的制备和性质研究[D];苏州大学;2001年

2 胡学军;抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)单链抗体基因克隆及其在大肠杆菌和烟草中的表达[D];大连理工大学;2002年

3 李铁军;抗甲胺磷噬菌体单链抗体库的构建、筛选及单链抗体的表达与特性研究[D];南京农业大学;2008年

4 陈德宇;前列腺素D合成酶在男性生殖中的基础及应用研究[D];南京师范大学;2005年

5 熊盛;重组人源抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌和巴氏毕赤酵母中的表达、纯化与性质鉴定[D];华南理工大学;2002年

6 邵长利;抗人红细胞单链抗体融合HIV-1gp41抗原肽双功能分子的制备与鉴定[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年

7 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年

8 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年

9 余自强;抗血小板胶原受体糖蛋白VI单克隆抗体的制备和功能研究[D];苏州大学;2005年

10 王霞;抗人胃泌素单克隆抗体及其单链抗体的研制[D];四川大学;2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杨乃娣;全人源胃癌噬菌体单链抗体库的构建及其初步筛选[D];浙江大学;2010年

2 朱琳琳;全合成人源抗体库的构建及抗BHL-1单链抗体的初步筛选[D];吉林大学;2006年

3 徐飞虎;抗肺癌单链抗体偶联绿色荧光蛋白基因的构建及表达研究[D];浙江大学;2003年

4 张薇;抗T-2毒素单链抗体的制备及该毒素对细胞毒性影响的初步研究[D];福建农林大学;2010年

5 王溪桥;大容量人源肝癌核糖体展示单链抗体库的构建[D];兰州大学;2010年

6 江淼;抗活化血小板表面受体全套单链抗体噬菌体展示文库的构建和筛选[D];苏州大学;2003年

7 张庆丽;抗EGFRvⅢ特异性单链抗体的构建及其靶向性研究[D];南华大学;2011年

8 樊春波;全人源抗CCR7噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定[D];重庆医科大学;2010年

9 柴蔚然;重组人TNF-α免疫小鼠全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建[D];山西医科大学;2003年

10 李辉;重症肌无力抗乙酰胆碱受体单链抗体A7基因的表达及特性鉴定[D];延边大学;2005年

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本文编号：684954