TAT-Cytoglobin融合蛋白的原核表达、纯化及生物活性分析

发布时间：2017-08-17 17:39

  本文关键词：TAT-Cytoglobin融合蛋白的原核表达、纯化及生物活性分析

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【摘要】：旨在利用细胞穿膜肽TAT的穿膜作用和细胞珠蛋白(Cytoglobin,Cygb)的抗衰老、抗纤维化的功能,将二者通过基因工程的手段融合在一起,以期获得能够穿透细胞屏障的Cygb。通过两次重叠PCR技术获得了TAT-Cygb DNA,将其插入原核表达载体pET22b质粒中,转化至大肠杆菌BL-21,筛选出可表达TAT-Cygb融合蛋白的大肠杆菌工程菌株。经乳糖诱导表达TAT-Cygb,CM阳离子交换层析(CM Sepharose Fast Flow Protocol)获得纯度高达95%的TAT-Cygb融合蛋白,分子量约23 kDa。生物活性实验显示,TAT-Cygb过氧化物酶比活力达到(422.30±0.36)U/mg。TAT-Cygb预处理的Hacat细胞可免受H2O2氧化应激的损伤(RGR=100%),同时TAT-Cygb可治疗已被H2O2氧化损伤的细胞(RGR=98%),与Cygb处理组相比具有显著差异(RGR=79%)。该研究首次成功利用大肠杆菌表达系统表达了可穿透细胞膜的、有生物活性的TAT-Cygb融合蛋白,为继续开展Cygb在抗衰老、抗纤维化和抗癌领域的研究奠定了基础。
【作者单位】： 华侨大学生物医学学院;分子药物教育部工程研究中心;
【关键词】： 细胞穿膜肽 细胞珠蛋白 融合蛋白 纯化 氧化应激
【基金】：国家自然科学基金(Nos.81072578,81271692)资助~~
【分类号】：R3411
【正文快照】： 细胞珠蛋白(Cytoglobin,Cygb)是由190个氨基酸组成、分子量为21.4 kDa的一种细胞内球蛋白,在高等脊椎动物各组织中广泛分布[1],最初由Kawada等在大鼠肝星状细胞(Hepatistellate cells,HSC)中发现[2]。研究表明Cygb具有过氧化物酶活性,可清除氧自由基,因此可保护组织免受氧化应

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